[发明专利]一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂

说明书

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种无糖基化抗PD‑1单克隆抗体的冻干制剂，包括无糖基化抗PD‑1单克隆抗体、缓冲经体系、赋形剂和增溶剂。本发明在冻干过程中增加了退火步骤，本发明所述冻干制剂配方简单、辅料更少，进一步降低了冻干粉的含水量，提高药物的稳定性，方便贮存和运输。

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂。

背景技术

程序性死亡受体-1(Programmed Death-1，PD-1)是一种有288个氨基酸的I型膜蛋白，是一致的主要免疫检查点(Immune Checkpoint)之一。PD-1作为免疫抑制性受体，主要在激活T细胞及B细胞中，作为T细胞抑制受体，与配体PD-L1结合，可以抑制T淋巴细胞的活性及相关的体内细胞免疫反应，在肿瘤细胞中可限制T细胞效应子的功能，在肿瘤免疫逃逸中具有重要作用。肿瘤免疫疗法，即利用人体自身的免疫系统抵御癌症，是一种突破性的肿瘤治疗方法，但是肿瘤微环境可保护肿瘤细胞免受有效的免疫破坏，因此如何打破肿瘤微环境称为抗肿瘤研究的重点。

现有研究成果已确定了PD-1在肿瘤微环境中的作用：PD-L1在许多小鼠和人肿瘤中表达(并在大多数PD-L1阴性肿瘤细胞系中可由IFNγ诱导)，并被推定为介导肿瘤免疫逃避的重要靶点。通过免疫组织化学评估活组织检查，乙腈在人的很多原发性肿瘤中发现PD-1(在肿瘤浸润淋巴细胞上)和/或PD-L1在肿瘤细胞上的表达。这样的组织包括肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、结肠癌、神经胶质瘤、膀胱癌、乳腺癌、肾癌、食道癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌、尿道上皮细胞癌和胰腺癌及头颈肿瘤等。由此可见，阻断PD-1/PD-L1的相互作用可以提高肿瘤特异性T细胞的免疫活性，有助于免疫系统清除肿瘤细胞，因此PD-1称为开发肿瘤免疫治疗药物的热门靶点。

目前，国外开发研制抗PD-1单克隆抗体如opdivo，keytruda等抗PD-1单克隆抗体已经获批上市。然而这些抗体作为单药应答率低，本发明使用的单克隆抗体其上糖基化修饰被敲除，虽然工艺开发比较稳定，均一性提高，且有望获得更好的临床效果，但同时相比较其他抗PD-1单克隆抗体，其由于去除糖基化而对胰蛋白酶等的敏感性显著增加，结构灵活性增强，在低PH下更容易有聚体形成的趋势，易聚集沉淀。为了防止蛋白在使用前的储存期间发生变性，聚集作用所导致活性或者结构完整性的丧失，针对无糖基化抗PD-1单克隆抗体的制剂工艺开发很有必要。

通常，蛋白质具有非常短的半寿期，并且在暴露于各种因素(如不适宜温度、水-气界面、高压、物理/机械应力、有机溶剂和微生物污染)之后经历变性(如聚集、解离和吸附在容器表面)。因此，变性蛋白失去内在的理化性质和生理活性。蛋白质的变性通常是不可逆的，因此，蛋白质一旦变性，他们的天然性质可能不会恢复到初始状态。

现有技术中PD-1的制剂多是液体制剂，然而在生物制药行业中，使用重组DNA技术制备的蛋白质在水性制剂中的长期储存通常是一项困难的任务。为了克服水性制剂中的蛋白质的稳定性问题，本发明提供一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，本发明所述制剂配方简单、辅料更少、稳定性好，方便储存和运输。

本发明的具体技术方案为：

一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的冻干制剂，含有无糖基化抗PD-1单克隆抗体、缓冲体系、赋性剂和增溶剂。

其中所述缓冲体系选自醋酸/醋酸钠，柠檬酸/柠檬酸钠，组氨酸/盐酸组氨酸中的一种。

其中所述的赋形剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇中的一种或几种。

其中所述增溶剂选自聚山梨酯20或聚山梨酯80。

本发明通过缓冲体系调节pH，优选pH5.5～6.0。