[发明专利]一种用于锚定小麦4D染色体的特异性探针和锚定方法

说明书

本发明公开了一种用于锚定小麦4D染色体的特异性探针和锚定方法，该特异性探针包括SEQ ID NO：1所示的寡核苷酸，还可以包括荧光基团，荧光基团与寡核苷酸的5'端连接。本发明提供的小麦4D染色体的特异性探针，可有效快速地从普通小麦遗传背景中鉴定/锚定4D染色体，且有利于对4D染色体进行高纯度的流式分选。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种用于锚定小麦4D染色体的特异性探针和锚定方法。

背景技术

小麦是世界上第一大粮食作物，在我国也是仅次于水稻的第二大粮食作物。小麦为异源六倍体作物(基因组为AABBDD)，基因组巨大(约为17G)且重复序列多，结构复杂。对其进行基因组测序成本非常高，且在重复序列丰富区域常常不能正确组装。单染色相较于整个基因组而言，数据量小(常为数百兆)，因此测序成本低。且对单染色体测序，避免了其他染色体对其的干扰，组装准确度也较高。因此，单染色体测序对于基因组较大的作物，特别是小麦，具有重要意义。而准确分选出需要测序的目标染色体，则是进行单染色体测序的前提。单染色体分选可基于染色体大小和荧光标记强度两种方式进行。对于小麦而言，A、B、D组内染色体大小差异不大，按照染色体大小进行分选难以获得高纯度目标染色体，因而也就无法进行后期单染色体测序。而开发单染色体特异探针，可使目标染色体携带特异的荧光信号，从而达到高纯度分选的目的。但现有技术中未见有小麦4D染色体特异探针的相关报道。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种用于锚定小麦4D染色体的特异性探针和锚定方法，可有效快速地从普通小麦遗传背景中鉴定/锚定4D染色体，且有利于对4D染色体进行高纯度的流式分选。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种寡核苷酸，该寡核苷酸的序列如SEQ ID NO：1所示。

一种核酸探针，该核酸探针包括上述SEQ ID NO：1所示的寡核苷酸，优选地，该核酸探针还包括荧光基团，该荧光基团与寡核苷酸的5'端连接，该荧光基团可为4-甲基-6-羧罗丹明，但并不局限于4-甲基-6-羧罗丹明，只要能起到可直观明了的观察结果的标记基团均可。

上述核酸探针可用于锚定小麦4D染色体，有利于对4D染色体进行高纯度的流式分选。

采用上述核酸探针对小麦4D染色体进行快速锚定的方法，包括以下步骤：

(1)对待测样品进行处理，并制片；

(2)将上述核酸探针与处理后的待测样品进行荧光原位杂交，然后镜检。

进一步地，步骤(1)具体步骤为：取小麦根尖，将其制备成小麦根尖细胞悬浮液，然后利用该小麦根尖细胞悬浮液进行滴片制成常规的待检玻片。

进一步地，步骤(2)具体过程为：将探针用杂交缓冲液稀释，使其浓度为1nmol/100uL，得工作液，然后将工作液和杂交缓冲液按体积比为1:3-5混合，得杂交液，将杂交液滴于待检玻片上，进行荧光原位杂交，然后镜检。优选地，工作液和杂交缓冲液的体积比为1:4。

进一步地，杂交缓冲液为2×SSC和1×TE按体积比为1:1混合的混合液。

进一步地，杂交条件为37℃，黑暗条件下杂交3h。

本发明提供的用于锚定小麦4D染色体的特异性探针和锚定方法，具有以下有益效果：

本发明提供的小麦4D染色体的特异性探针S1000，可有效快速地从普通小麦遗传背景中鉴定/锚定4D染色体，且有利于对4D染色体进行高纯度的流式分选。

附图说明

图1为本发明的流程示意图；

图2为六倍体小麦的FISH图。

具体实施方式