[发明专利]一种阴道上皮细胞分离培养方法

权利要求书

1.一种阴道上皮细胞分离培养方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）剪碎组织，先用消化液A消化，然后过70~100微米细胞筛，收集细胞；其中，所述的消化液A为含0.01~0.04g/100ml EDTA的0.2~0.3g/100ml胰酶溶液；

（2）剩余的组织继续加入混合消化液消化，然后过70~100微米细胞筛，收集细胞；其中，所述的混合消化液为含0.06~0.08g/100ml透明质酸酶、0.04~0.06g/100ml I型胶原酶和0.01~0.02g/100ml DNA酶的溶液；

（3）把两次收集的细胞离心，用改良KSFM培养基清洗若干遍后，得到阴道上皮细胞，铺于Matrigel预包被的细胞培养板中进行培养和扩增；

（4） 将步骤（3）中分离获得的阴道上皮细胞在改良KSFM培养基上培养传代；所述的改良KSFM培养基为加入1~4% FBS和4~5.5ng/ml bFGF的KSFM培养基。

2.根据权利要求1所述的阴道上皮细胞分离培养方法，其特征在于步骤（1）中消化液A为含0.02g/100ml EDTA 的0.25%的胰酶溶液。

3.根据权利要求1所述的阴道上皮细胞分离培养方法，其特征在于步骤（1）中所述的组织剪碎至0.5~1.5 mm³。

4.根据权利要求1所述的阴道上皮细胞分离培养方法，其特征在于步骤（1）中所述的混合消化液为含0.069g/100ml透明质酸酶、0.049g/100ml I型胶原酶和0.012g/100ml DNA酶的溶液。

5.根据权利要求1所述的阴道上皮细胞分离培养方法，其特征在于步骤(3)和（4）中所述的改良KSFM培养基为加入2% FBS和5ng/ml bFGF的KSFM培养基。

6.一种阴道上皮细胞分离培养试剂盒，其特征在于包含：

（1）消化液A：含0.01~0.04g/100ml EDTA的 0.2~0.3g/100ml胰酶溶液；

（2）混合消化液：含0.06~0.08g/100ml透明质酸酶、0.04~0.06g/100ml I型胶原酶和0.01~0.02g/100ml DNA酶的溶液；

（3）改良KSFM培养基：加入1~4% FBS和4~5.5ng/ml bFGF的KSFM培养基。

7.根据权利要求6所述的阴道上皮细胞分离培养试剂盒，其特征在于由以下试剂组成：

（1）消化液A为含0.02g/100ml EDTA 的0.25g/100ml%的胰酶溶液；

（2）混合消化液：0.069g/100ml透明质酸酶、0.049g/100ml I型胶原酶和0.012g/100mlDNA酶溶液；

（3）改良KSFM培养基：加入2% FBS和5ng/ml bFGF的KSFM培养基。