[发明专利]一种植物DNA的快速提取方法

说明书

本发明公开了一种植物DNA的快速提取方法，包括以下步骤：步骤1：将新鲜植物组织研磨成匀浆；步骤2：向匀浆中加入改良裂解液，离心，获取上清液；所述改良裂解液包含以下组分：Tris‑HCl、NaCl溶液、EDTA溶液、PVP、改性活性炭；步骤3：向上清液中加入95％乙醇溶液，离心获取沉淀；步骤4：用75％乙醇溶液进行洗涤沉淀，得到纯品DNA。本发明方法简单易实施，为使用高毒化学试剂，有利于试验人员的身心健康，更重要的是，通过裂解液的改良，可以明显的提高植物DNA的提取质量和纯度，实用性比较强。

技术领域

本发明涉及基因提取技术领域，特别是涉及一种植物DNA快速提取方法。

背景技术

DNA提取是分子生物学试验最基础的试验，也是进行后期基因研究最重要的保证。目前，进行DNA提取常用的方法有CTAB法、试剂盒法、SDS法，但是这些方法在进行植物基因提取的过程中存在步骤多、操作繁琐、操作时间长、使用高毒有害试剂等缺点。而只有提取高质量、高纯度的DNA才能对于限制性酶切、PCR扩增、分子杂交、遗传多态性分析、基因组学等分子生物学研究打下良好基础。

植物细胞含有细胞壁，含有较多的多糖、多酚等次生代谢产物，并且不同的植物细胞中含有的次生代谢产物的种类及含量差异较大，DNA含量相对较小，会导致在提取过程中一些其他杂质类的物质与DNA粘附或者在繁琐提取过程中导致DNA片段的丢失，进而影响DNA的提取质量和纯度。而如何在现有的提取方法上进行改进，得到一种高效、快捷、毒性低的提取高质量DNA的方法对于解决现有技术问题极为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种植物DNA的快速提取方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法通过在常规的裂解液的基础上添加适量的PVP以及改良活性碳，可以提高植物匀浆和多糖和多酚物质的溶解性，并将其进行沉淀去除，实现了提取高质量、高纯度的DNA的目的。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种植物DNA的快速提取方法，包括以下步骤：

步骤1：将新鲜植物组织研磨成匀浆；

步骤2：向匀浆中加入改良裂解液，离心，获取上清液；所述改良裂解液包含以下组分：Tris-HCl、NaCl溶液、EDTA溶液、PVP以及改性活性炭；

步骤3：向上清液中加入95％乙醇溶液，离心获取沉淀；

步骤4：用75％乙醇溶液进行洗涤沉淀，得到纯品DNA。

优选的是，步骤1中在液氮环境中进行研磨。

优选的是，步骤2中，Tris-HCl 100moL/L pH8.0，NaCl溶液0.5moL/L，EDTA溶液20moL/L，PVP 0.5％以及改性活性炭0.5-1％。

优选的是，步骤2中所述改良裂解液加入所述匀浆前，先在40-50℃条件下预热15-20min。

优选的是，步骤2中离心方式为：先在20℃、2000-4000rpm离心2-3min，再于20℃、6000-8000rpm离心15-20min。

优选的是，步骤2中匀浆和所述改良裂解液按质量体积比1:15-20混合。

优选的是，所述改性活性碳是由以下方法制备：将活性炭和硝酸溶液按质量体积比1：3-4混合，回流4-5h，再用水洗涤，置于烘箱中干燥得到改性活性炭。

优选的是，所述硝酸的体积分数为10％；回流温度为40-50℃；在110℃烘干处理8-10h。

优选的是，步骤3中离心速度为4000-5000rpm，离心时间15-20min。

优选的是，步骤4中75％的乙醇溶液提前预冷至4℃，再洗涤3-5次，置于-20℃保存。