[发明专利]一种结核分枝杆菌核酸适配子及其制备方法

说明书

本发明涉及适配子技术领域，公开了一种结核分枝杆菌核酸适配子，通过SELEX筛选方法得到结核分枝杆菌特异亲和的适配子，其核苷酸序列SEQ ID NO：0所示；对其进行结构改造，筛选出SEQ ID NO：2‑3。还公开了该种结核分枝杆菌核酸适配子的制备方法。本发明通过SELEX技术筛选出结核分枝杆菌高度特异亲和的核酸适配子，对适配子进行结构改造，提高对菌株结合的亲和性与特异性，利用荧光显微分析仪观察结核分枝杆菌的形态，并进行计数，可以显著提高菌种分析的灵敏度。此方法操作方法简单，对操作人员要求低，可以有效节约人力成本。

技术领域

本发明涉及适配子技术领域，涉及了一种结核分枝杆菌核酸适配子，还包括该种结核分枝杆菌核酸适配子的制备方法。

背景技术

结核分枝杆菌(M.tuberculosis)是结核病的病原菌，可侵犯全身各组织器官，但以肺部感染最多见。1980年代后，随着艾滋病的流行、结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人口流动加剧等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化。据WHO统计，全世界约每4个人中就有1个人感染了结核分枝杆菌，在某些发展中国家成人中结核分枝杆菌携带率高达80％，其中约5％～10％携带者可发展为活动性结核病。目前全球每年约出现1000万结核新病例，并导致约170万人死亡。我国每年死于结核病的人约25万之多，是各类传染病死亡人数总和的两倍多。因此，结核病又成为了威胁人类健康的全球性卫生问题，并成为某些发展中国家和地区，特别是艾滋病高发区人群的首要死因。世界卫生组织和各国对结核病的发展形势日益严峻重视。相比之下，人类对非结核分枝杆菌(NTM)所引起的感染，却未充分认识，也未被引起足够重视。从我国历次的结核病流行病学调查资料显示，NTM分离率由1990年的4.9％上升至2000年的11.1％，到2010年的22.9％，基本反映了我国的NTM病呈明显上升的态势，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。更为重要的是，NTM肺病临床症状与体征极似肺结核病，同样可产生咳嗽、咯痰、咯血、胸痛、气急、盗汗、低热、乏力、消瘦、萎靡不振等症状，在无菌种鉴定结果的情况下，可长期被误诊为结核病。但两种感染的治疗用药却完全不同，NTM对许多抗结核药物天然耐药，且不同NTM菌种对药物敏感性各不相同。目前常用痰标本结核分枝杆菌检测方法是痰涂片镜检法，其检测灵敏度低(10000条/mL)，往往会导致部分病人会漏诊，无法在第一时间获得治疗而流向社会。由于结核分枝杆菌空气传播的特性，在人群中必然成为无法识别、无法防范的传染源。另外镜检法只能确认是否感染分枝杆菌，无法鉴别结核分枝杆菌还是非结核分枝杆菌，容易造成误诊与错误用药，错过最佳的治疗时间。痰结核分枝杆菌常规培养法即通过在鉴别培养基上培养后，通过观察细菌菌落形态、生长速度、生长温度和色素，以及一系列的生化试验，实现MTB和NTM的初步鉴定。该方法是鉴定细菌活性的“黄金标准”，但是操作比较繁琐、费时，需要4～8周时间，并受到菌量、菌龄的影响。此外，由于菌株易发生变异，出现非典型生物学特征，难以判断生化反应结果，而影响鉴定的准确性。以基因检测为诊断依据的结核分枝杆菌菌种鉴定方法包括Souther blotter、PCR扩增、RFLP、基因芯片、测序等。目前商品化的分枝杆菌菌种鉴定试剂盒都是以16S rDNA序列为检测靶标的。然而由于分枝杆菌某些菌种生长比较慢，16S rDNA保守性比较强，以单一的16SrDNA为检测靶标时，需进一步借助探针或测序的方法才能实现结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断，而且操作复杂，检测成本高，降低了在临床上的广泛应用。

发明内容

本发明针对现有技术的缺点，提供了一种结核分枝杆菌核酸适配子，还公开了该种结核分枝杆菌核酸适配子的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种结核分枝杆菌核酸适配子，通过SELEX筛选方法得到结核分枝杆菌特异亲和的适配子，其核苷酸序列SEQ ID NO：0所示。SEQ ID NO：0为GGGAGCTCAGTTTAAACGCTCAATAGTCAAGCGATTGATAGACGGGCTTTGACACGTGTTCGAAGGGCATGGGGGATC。