[发明专利]一种藤苦参组织培养方法

说明书

本发明公开了一种藤苦参组织培养方法，过程包括：外植体灭菌、种子萌发培养、丛生芽分化培养、生根壮苗培养、定植。在藤苦参不同发育阶段使用不同浓度的植物生长调节剂，显著提高了藤苦参幼芽、分化芽及幼苗的数量和质量，提高了组织培养的成活率。

技术领域

本发明涉及组织培养与繁殖技术领域，更具体地说是涉及一种藤苦参的组织培养方法。

背景技术

藤苦参系萝藦科马莲鞍属植物马莲鞍的干燥根，又名古羊藤、南苦参，为傣药解药精方雅叫哈顿散中的主治药之一，在云南、广西等地被广泛用于治疗痢疾、湿热腹泻、心胃气痛、感冒发热、慢性胃炎、跌打损伤等症。

现有技术中，藤苦参的繁殖方法通常采用种子繁殖，压条繁殖，组织培养等；藤苦参种子繁殖费时费工，而且经30~40天方可出苗，2~3年后才可移栽，长成药材的时间则更长。而藤苦参压条繁殖的成活率较低，不利于规范化种植。藤苦参组织培养(快速繁殖)效率较高，且简便易行，收效快，效果好，故生产上多推荐采用组织培养法。藤苦参组织培养苗一旦成活，根深扎后耐旱能力较强，具有较强的环境生存能力。

因此，如何提供一种可以显著提高藤苦参组培苗质量的组织培养方法是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种藤苦参组织培养方法，在藤苦参不同发育阶段使用不同浓度的植物生长调节剂，显著提高了藤苦参幼芽、分化芽及幼苗的数量和质量，提高了组织培养的成活率。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种藤苦参组织培养方法，包括下述步骤：

1)外植体灭菌：将藤苦参果荚进行预处理，取出果荚中的种子，消毒，备用；

对藤苦参果荚进行预处理并对种子进行消毒的过程包括：

11)以无菌水对藤苦参果荚进冲洗3次，每次1-2分钟；

12)取出藤苦参果荚中的种子，以75％酒精浸泡种子20-30s，然后以无菌水对种子冲洗3次，每次1-2分钟；

13)用0.1％升汞浸泡经步骤12)处理后的种子10-15min，然后用无菌水冲洗4～5次，每次1分钟，备用；

2)种子萌发培养：将步骤1)中消毒后的种子接种于添加有0.8-2.0mg/L6-BA、0.2-0.5mg/LNAA和1g/L活性炭的MS培养基中进行萌发培养，20-25d后，得到藤苦参幼芽；

3)丛生芽分化培养：将步骤2)所得藤苦参幼芽接种至添加有3.0-4.0mg/L6-BA和0.2-0.5mg/LNAA的MS培养基中进行分化培养，35-45d后得到藤苦参分化芽；

4)生根壮苗培养：待步骤3)中的藤苦参分化芽长成3-4cm幼苗时，将其转接到添加有1.0mg/LNAA和1g/L活性炭的MS培养基中进行生根壮苗培养，45-55d后，得到生根幼苗；

5)炼苗及定植：将步骤4)得到的生根幼苗置于自然光下培养3天，打开试管苗瓶盖炼苗3天，然后用镊子轻轻夹出试管苗，洗去基部的琼脂，移栽到添加了1/2MS营养液的砂土中，4周后移栽至土壤中，进行定植。

以上技术方案达到的技术效果是：在组织培养中，激素和生长素的合理配合是达到最佳培养效果的关键，本发明在种子萌发、丛生芽分化及生根壮苗阶段，向MS固体培养基中加入不同浓度的植物生长调节剂，进而使得特定浓度的6-BA和NAA之间具备协同增效作用，显著提升了萌发率和丛生芽分化量，提高了幼苗的质量；

在植物生根培养过程中，适当的增加光照时间有利于小苗生根，但强光直接照射根部会抑制根的生长，所以在生根壮苗培养基中添加活性炭可提供生根的暗环境，防止褐变；活性炭还可以吸附植物生长过程中释放的一些有害物质，利于幼苗的生长。