[发明专利]一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202010053979.4 | 申请日： | 2020-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN111100209A | 公开（公告）日： | 2020-05-05 |
| 发明（设计）人： | 潘鹏涛;王选年;邹凡雨;李文明 | 申请（专利权）人： | 新乡学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;G01N33/574 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王敏 |
| 地址： | 453000 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 g3p20 31 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组蛋白G3P20-31，其特征在于，将P53蛋白N段20-31位氨基酸SDLWKLLPENNV展示在丝状噬菌体次要外壳蛋白PIII上；所述重组蛋白G3P20-31的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白G3P20-31，其特征在于，编码所述重组蛋白G3P20-31的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1或2所述的一种重组蛋白G3P20-31的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)对载体fADL-le进行Bgl I酶切，并回收酶切后的载体fADL-le；
(2)合成噬菌体展示表位SDLWKLLPENNV：
合成编码P53蛋白N端第20-31位氨基酸SDLWKLLPENNV的两个互补DNA片段；
5’-CGGCCATGGCATCAGACCTATGGAAACTACTTCCTGAAAACAACGTTGGCCCGGG-3’；SEQ IDNO.3；
5’-GGGCCAACGTTGTTTTCAGGAAGTAGTTTCCATAGGTCTGATGCCATGGCCGGCT-3’；SEQ IDNO.4；
将两种片段溶解后等摩尔混合，94℃变性5min后58℃复性4min，使两条片段互补结合成双链，合成目的片段；
(3)将步骤(1)获得的酶切后的载体fADL-le与步骤(2)合成的目的片段连接，16℃反应过夜，获得重组质粒；
(4)将重组质粒转化大肠杆菌JM109感受态细胞，挑取阳性克隆，进行PCR鉴定；
(5)利用鉴定正确的阳性克隆制备展示重组蛋白G3P20-31的噬菌体。
4.根据权利要求1-3所述的重组蛋白G3P20-31在制备检测肿瘤患者血清p53抗体的生物制品中的应用。
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