[发明专利]一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组蛋白G3P20‑31及其制备方法和应用，属于生物工程中的DNA重组技术领域。本发明利用噬菌体展示技术将编码P53蛋白N端20‑31肽段的基因片段克隆到丝状噬菌体载体PIII蛋白基因中，制备出一种展示P53蛋白表位的重组蛋白，并将该重组蛋白展示在噬菌体表面，进而用于肿瘤患者血清p53抗体检测。本发明还公开了重组蛋白G3P20‑31在制备检测肿瘤患者血清p53抗体的生物制品中的应用，该生物制品具有特异性强、灵敏度高、制备简单、成本低廉等优点。

技术领域

本发明涉及生物工程中的DNA重组技术领域，更具体的说是涉及一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用。

背景技术

癌症是威胁人类健康的主要杀手，在我国每年癌症发病人数约260万，死亡约180万。导致这一现象的原因很多，其中一个重要的原因是目前人类还不能对肿瘤的发生发展过程进行有效的诊断，尤其是早期诊断。

p53是一种抑癌基因，其蛋白对维持正常的细胞分裂与生长起重要的调节作用；但是一旦该基因发生突变，其编码的突变蛋白半衰期延长，失去抑癌作用，积累于细胞内并刺激免疫系统产生P53抗体。研究表明，血清P53抗体可以作为一种广谱性的肿瘤标志物用于肿瘤早期检测和肿瘤高危人群的筛查。

目前，血清p53抗体的检测主要以重组p53蛋白为基础开展，而蛋白的制备及纯化具有操作繁琐、费时、价格相对昂贵且灵敏度低等缺点。因此，提供一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种重组蛋白G3P20-31及其制备方法和应用，制备方法简单、成本低、灵敏度高，重组蛋白G3P20-31能够用于肿瘤患者血清p53抗体的检测。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

肿瘤患者体内血清P53抗体识别的表位主要位于P53蛋白的N段，其中N段 20-31氨基酸是该抗体识别的一个关键表位。

一种重组蛋白G3P20-31，由P53蛋白表位(SDLWKLLPENNV)与丝状噬菌体次要外壳蛋白g3p组成，具体为将P53蛋白N段20-31位氨基酸 SDLWKLLPENNV展示在丝状噬菌体次要外壳蛋白PIII上；所述重组蛋白 G3P20-31的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。黑色加粗部分为P53蛋白表位 (SDLWKLLPENNV)。

MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMASDLWKLLPENNVGPGGLSLEAETV ESCLAKPHTENSFTNVWKDDKTLDRYANYEGCLWNATGVVVCTGDETQ CYGTWVPIGLAIPENEGGGSEGGGSEGGGSEGGGTKPPEYGDTPIPGYTYI NPLDGTYPPGTEQNPANPNPSLEESQPLNTFMFQNNRFRNRQGALTVYTGT VTQGTDPVKTYYQYTPVSSKAMYDAYWNGKFRDCAFHSGFNEDPFVCEY QGQSSDLPQPPVNAGGGSGGGSGGGSEGGGSEGGGSEGGGSEGGGSGGGS GSGDFDYEKMANANKGAMTENADENALQSDAKGKLDSVATDYGAAIDG FIGDVSGLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQ SVECRPYVFGAGKPYEFSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILR NKES；SEQ ID NO.1。

进一步，编码所述重组蛋白G3P20-31的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。