[发明专利]一种从人胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法

说明书

本发明提供了一种从胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法。该方法可有效缩短间充质干细胞原代细胞培养时间，对组织块伤害小，可以稳定进行多次间充质干细胞原代培养，操作简便，实用性强，因此本发明在间充质干细胞原代细胞培养及其应用等方面具有广阔的应用前景。在此基础上，发明人还提供了一种纯化间充质干细胞的培养方法，可将细胞纯度提高到99％。本发明还公开了一种提取间充质干细胞分泌物的方法，建立了相关的质量控制与评价实验，使得间充质干细胞分泌物能有效地在化妆品、保健品等行业进行应用。本发明不仅适用于人和小鼠等间充质干细胞培养，同时也适用于骨髓或脂肪来源的干细胞、癌旁组织等细胞培养。

技术领域

本发明涉及干细胞及其分泌物提取技术，特别是一种从人胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法。

背景技术

干细胞，是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞及组织，具有免疫调节、再生修复等生物学功能。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是来源于中胚层的成体干细胞，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，在体内或体外特定的诱导条件下可分化为骨、软骨、脂肪、肌肉及神经细胞等，且具有促进组织修复、免疫调节和支持造血的功能，免疫原性低，所以MSCs是再生医学和免疫调节治疗最具应用前景的组织工程种子细胞。干细胞分泌物，是干细胞经过特殊培养后分泌出的多种活性物质，包括蛋白质、细胞因子、多肽等等，在抗衰老、美容、细胞修复等方面具有功效。

间充质干细胞相对于其他干细胞，其来源广泛，目前已经从骨髓、脂肪、肌肉、心脏、脐带血、脐带、胎盘等组织中相应找到。

目前，间充质干细胞的分离培养方法主要有两类：酶消化法和组织块贴壁法。不同分离方法获得的间充质干细胞的纯度不等，这极大地影响了治疗效果的稳定性，且MSCs的不同亚群在疾病治疗方面有着不同的作用。

本发明提供了一种从胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法。该方法在常规组织块贴壁法的基础上，加以优化改良：采用少量多次加液方式，使小组织也能达到优良的贴壁效果；同时使用自主研发的间充质干细胞选择性选择性完全培养基，使间充质干细胞原代细胞快速爬出生长，且纯度在95％以上；在此基础上，发明人还提供了一种纯化间充质干细胞的培养方法，可将细胞纯度提高到99％。同时，本发明公开了一种提取间充质干细胞分泌物的方法，设计了一系列相关的质量控制与评价实验，使得间充质干细胞分泌物能有效地在化妆品、保健品等行业进行应用。本发明提供的方法可有效缩短间充质干细胞原代细胞培养时间，对组织块伤害小，可以稳定进行多次间充质干细胞原代培养，操作简便，实用性强，因此本发明在间充质干细胞原代细胞培养及其应用等方面具有广阔的应用前景。本发明不仅适用于人和小鼠等间充质干细胞原代细胞培养，同时也适用于骨髓来源干细胞、脂肪来源干细胞、癌旁组织等原代细胞培养。

发明内容

为了解决现有技术中存在的种种缺陷，本发明在常规组织块贴壁法的基础上，加以优化改良，旨在提供一种从胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法，在保证细胞活率高的同时，有效提高贴壁率，缩短获得稳定高纯度细胞所需要的原代培养时间。具体地，本发明提供了以下技术方案，以实现上述目的：

第一方面，本发明提供了一种从胎盘或脐带中提取间充质干细胞及提取其分泌物的方法，包括以下步骤：

步骤(1)：胎盘或脐带收集：

1.1根据评判标准：符合是健康产妇(病毒检测结果阴性、遗传病检查项目阴性等)，足月婴儿，剖腹产等条件的胎盘或脐带方能收集)进行筛选，根据样本收集标准进行胎盘或脐带收集操作；

1.2将胎盘或脐带装入无菌容器中，无菌容器内保存液(含庆大霉素的生理盐水)必须浸没过胎盘或脐带，密封容器并在4℃条件下8小时内运送回洁净实验室。

步骤(2)、原代细胞处理：

2.1胎盘处理：