[发明专利]一种利用线粒体分子标记鉴定柑橘潜叶蛾的方法

说明书

本发明公开了一种利用线粒体分子标记鉴定柑橘潜叶蛾的方法，属于分子生物学技术领域，该分子标记包括以下引物：F：5’‑ATTGCCCACGGTGGTAGATC‑3’；R：5’‑ACTGCTCCTATGGAAAGAACGT‑3’；该方法包括(1)提取供试样品中的DNA；(2)采用上述的线粒体分子标记对供试样品的模板DNA进行PCR，获取PCR扩增产物；(3)所得PCR扩增产物进行凝胶电泳，对电泳检测结果通过分析基本核心SSR结果，确定其品种；该线粒体分子标记挑选的引物具有扩增稳定、条带清晰易判读、多态性高、重复性好，可有效用于柑橘潜叶蛾鉴定、DNA指纹图谱构建及遗传多样性评价及系统发育研究领域。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种利用线粒体分子标记鉴定柑橘潜叶蛾的方法。

背景技术

柑桔潜叶蛾Phyllocnistis citrella Stainton,属鳞翅目(Lepidoptera),叶潜蛾科(Phyllocnistidae),是柑桔以及部分芸香科植物上的一种危害性较大的害虫。在亚洲、北美洲、大洋洲和非洲的许多国家与地区都有分布，在我国江苏、福建、浙江、海南、广西、广东、湖南、湖北、贵州、四川、重庆等柑橘产区也普遍发生，给柑橘产业造成了严重的经济损失。

柑橘树因柑橘潜叶蛾危害而造成大量伤口，容易诱发溃疡病的发生，给害螨、盾蚧、粉蚧和卷叶虫等提供了良好的过冬场所。柑橘潜叶蛾能导致树体衰弱，落果严重，引起柑橘产量和品质低下，威胁柑橘产业和果品安全。

目前采用的防治时期一般是选择成虫羽化期和低龄幼虫期，防治成虫可在傍晚进行；防治幼虫，宜在晴天午后用药。可喷施10％二氯苯醚菊酯2000-3000倍液，或2.5％溴氰菊酯2500倍液，或25％杀虫双水剂500倍液，或25％两维因可湿性粉剂500-1000倍液，或5％吡虫啉乳油1500倍液。每隔7-10天喷1次，连续喷3-4次。虽然化学药剂的使用可以达到一定的效果，但是长期使用容易造成化学药物残留，并且柑橘潜叶蛾还可能产生抗药性，目前为止没有很好的预防方式。

生物预防病虫害是一种有效且环保的方式，但是对于柑橘潜叶蛾自身的遗传信息的研究却少有研究和报道，使得如何利用生物信息防治柑橘潜叶蛾的危害受到极大限制。

基于柑橘潜叶蛾对于柑橘的严重危害，严重影响柑橘种植业的发展，开展柑橘潜叶蛾的品种鉴定、指纹图谱构建、遗传多样性评价及系统发育关系研究均有重要意义，然而上述工作都依赖于多态性高，重复性好、标记稳定、带型清晰易判读的分子标记的开发。基于此，发明人首次对柑橘潜叶蛾线粒体全基因组进行了测序，并对其生物学特性进行了分析，并进行了系统发育分析，以确定其在叶潜蛾科Phyllocnistidae中的地位。这为后期柑橘潜叶蛾的鉴定，以及生物防治柑橘潜叶蛾危害柑橘提供了理论基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用线粒体分子标记鉴定柑橘潜叶蛾的方法，以解决上述现有技术存在的问题，该分子标记挑选的引物具有扩增稳定、电泳条带清晰易判读，并且多态性高，重复性好，可有效用于柑橘潜叶蛾鉴定、DNA指纹图谱构建及遗传多样性评价及系统发育研究领域。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种用于鉴定柑橘潜叶蛾的线粒体分子标记，包括以下引物：

F：5’-ATTGCCCACGGTGGTAGATC-3’；

R：5’-ACTGCTCCTATGGAAAGAACGT-3’。

本发明还提供了一种利用线粒体分子标记鉴定柑橘潜叶蛾的方法，包括以下步骤：

(1)提取供试样品中的DNA；

(2)采用上述的线粒体分子标记对供试样品的模板DNA进行PCR，获取PCR扩增产物；