[发明专利]一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 202010057011.9 | 申请日： | 2020-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN111172236B | 公开（公告）日： | 2022-04-26 |
| 发明（设计）人： | 吴曈勃;肖先金;张家瑞 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/42 | 分类号： | C12Q1/42 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430074 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 碱性磷酸酶 开关 路径 选择器 测定 方法 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于，包括：将去离子水、CutSmart缓冲液、λexo缓冲液、含有荧光基团及猝灭基团的探针序列、含有5’-PO4的探针序列的互补链混合；
将混合液经85℃下升温和55℃下退火，冷却；
待冷却到37℃，加入λexo和待测样品，进行酶切反应，进行荧光检测；
所述荧光基团的5’末端有2-nt的突出结构；
所述互补链与探针序列互补，且在5’-PO4末端有1-10-nt的突出结构。
2.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述荧光基团为FAM荧光基团、HEX荧光基团或VIC荧光基团中的任一种。
3.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述猝灭基团为BHQ-1猝灭基团、BHQ-2猝灭基团和BHQ-3猝灭基团中的任一种。
4.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：所述互补链与探针序列互补，且在5’-PO4末端有7-nt的突出结构。
5.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：去离子水的用量为35μL；CutSmart缓冲液的用量为2.5μL；λexo缓冲液的用量为2.5μL；探针序列的用量为5μmol/L 5μL；互补链的用量为5μmol/L 5μL；在85℃下升温和55℃下退火，待冷却到37℃后，加入2μL的20U/L的λexo，1μL待测样品。
6.根据权利要求1所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法，其特征在于：借助酶标仪进行荧光检测，荧光强度30秒记录一次，记录20分钟，增益水平为60；激发波长和吸收波长分别设置为485nm和582nm。
7.如权利要求1-6任一所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法在碱性磷酸酶测定中的应用。
8.一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定试剂盒，其特征在于，包括：CutSmart缓冲液，λexo缓冲液、含有荧光基团及猝灭基团的探针序列、含有5’-PO4的探针序列的互补链，λexo；所述荧光基团的5’末端有2-nt的突出结构；所述互补链与探针序列互补，且在5’-PO4末端有1-10-nt的突出结构；利用所述试剂盒对碱性磷酸酶进行测定的方法同权利要求1-6任一所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定方法。
9.如权利要求8所述的一种基于以碱性磷酸酶为开关的路径选择器的碱性磷酸酶测定试剂盒在碱性磷酸酶测定中的应用。
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