[发明专利]基于CL7-CVN和Im7系统分离、富集和检测囊膜病毒的方法

权利要求书

1.一种基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将CL7-CVN的表达载体转化至第一宿主细胞中，诱导表达，纯化后得到重组CL7-CVN蛋白；

（2）将Im7的表达载体转化至第二宿主细胞中，诱导表达，纯化后得到Im7蛋白；

（3）将Im7蛋白与微球偶联反应，得到Im7-Beads微球；

（4）将待分离富集的囊膜病毒样品、重组CL7-CVN蛋白溶液及Im7-Beads混合后，孵育，离心得到富集囊膜病毒的Im7-Beads微球；

其中所述步骤(3)具体为：

S1：菊糖配制成溶液，加入六偏磷酸钠，充分搅拌溶解；再向体系中滴加碳酸钠溶液反应，反应结束后，离心得到沉淀，沉淀洗涤分散后得到Beads分散液；

S2：取乳化剂作为油相液，将所述步骤(2)得到的纯化的Im7蛋白、及Beads分散液分别逐滴加入上述油相液中，乳化后得到初步乳液；再将原花青素溶液逐滴加至所述初步乳液中，搅拌反应，反应结束后离心收集沉淀，洗涤后，得到Im7-Beads微球，于Na₃N保存。

2.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S1步骤中，六偏磷酸钠占菊糖的投入质量百分比为8%-10%。

3.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S1步骤中，滴加的碳酸钠溶液用于调节pH至10-10.5，反应温度控制为40-50℃，反应时间为3.5-4.0h，反应结束后调节pH至中性，反应结束后用95%乙醇溶液将反应结束后的溶液沉淀，沉淀用去离子水洗涤和分散。

4.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步骤中，Im7、Beads和原花青素的结合质量比为(200-300) : (100-150) :(0.02-0.025)，并且Im7溶液、Beads分散液和原花青素溶液的体积相等。

5.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步骤中，Im7、Beads和原花青素的结合质量比为(250-300) : (120-150) :0.02。

6.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述S2步骤中，乳化的时间为40-60min；将原花青素溶液逐滴加至初步乳液后，水浴控制温度37℃，反应时间40-48h，反应结束后离心收集沉淀，用异丙醇洗涤。

7.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，CL7-CVN与Im7-Beads混合的摩尔体积比为2.5-20μmol/mL。

8.如权利要求1所述的基于CL7-CVN和Im7系统分离和富集囊膜病毒的方法，其特征在于，所述步骤(4)中孵育的时间为40-100min。