[发明专利]一种肽的固相合成方法

说明书

本发明公开了一种肽的固相合成方法，该方法包括，制备linker‑A‑固相树脂，并以linker‑A‑固相树脂为起始树脂，应用于肽的固相合成中，其中A为一个或多个氨基酸。本发明通过在固相载体与目标肽之前引入linker‑A，大大优化了目标固相成环的空间环境，有效降低了固相合成中存在的空间位阻效应。该方法适用于大规模工业化生产，可以显著提高目标肽纯度及收率，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种以氨基酸延长linker进行多肽固相合成的方法。

背景技术

多肽的合成方法主要有固相法合成和液相法合成两种方式。液相法合成主要用于短肽合 成，并且有中间体纯化操作复杂、后处理操作繁琐、合成周期长等缺陷。R.BruceMerrifield 在1963年首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)，其合成方便、迅速、反应条件温和，迅速 得到广泛使用，目前85％以上的多肽药物都是通过固相合成得到的。固相合成方法广泛使 用的树脂为PS树脂，为聚苯乙烯共聚1％-2％二乙烯苯的树脂球，影响固相合成反应的主要 因素有三个，首先是树脂的替代值；其次为树脂的溶胀系数；第三，由于厂家工艺的差异， 也会导致树脂中活性位点的分布不均匀，同样会影响树脂的合成效果。由于固相树脂本身存 在的上述问题，导致在偶联过程由于空间位阻过大，氨基酸偶联困难，出现缺失肽等杂质， 不但影响样品的质量而且会降低产品的收率。例如，布美诺肽由7个氨基酸组成的环肽，成 环是其合成的难点，目前成环的方法有液相合成和固相合成，在液相合成中，成环过程容易 产生大量分子间偶联副产物，固相成环方法又因位阻空间太大导致成环困难。奥曲肽目前主 要有两种合成工艺，一种为：以氯甲基树脂为起始原料，将Boc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐， 按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用HCl/ 异丙醇脱去Boc-保护基团，用缩合剂进行接肽反应；用钯碳/氢气还原，同时将肽链切落， 获得还原型奥曲肽；在碱性条件下使还原型奥曲肽与氧化剂反应生成二硫键成环的奥曲肽粗 品。另一种合成工艺为：以CTC树脂为起始原料，将Fmoc-Thr(tBu)-OH制备成铯盐，按 照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次用20％ 哌啶脱去Fmoc-保护基团，用缩合剂进行偶联反应；最后采用TFA将肽链切落，获得还原 型奥曲肽；在酸性条件下使还原型奥曲肽氧化生成二硫键成环的奥曲肽粗品。上述两种工艺， 由于采用的是氯甲基树脂或CTC树脂，均可能由于氨基酸位阻过大或活性位点密度大，导 致出现偶联困难，致使样品纯度偏低、收率不高。

专利CN105601718B以RinkAmide Resin为固相载体，以HO-(CH2)n-COOH作为连接固相载体与目标肽的Linker合成布美诺肽，该发明通过在固相载体及布美诺肽之间引入长链脂肪酸，优化了目标肽固相成环的空间环境，避免了液相方式成环时所发生的分子间偶联， 然而，由于HO-(CH2)n-COOH linker与布美诺肽通过酯键缩合，样品成环后需要在碱性条 件下脱除HO-(CH2)n-COOH，在此过程中由于碱的存在，会导致布美诺的水解，产生不必要的杂质。专利申请文件CN106543269A是以Fmoc-Thr-x为原料合成奥曲肽，该方法的优 点为采用Fmoc-Thr-x与AM树脂偶联，避免了Boc-Thr(tBu)-OH或Fmoc-Thr(tBu)-OH先 制备成铯盐再与氯甲基树脂或CTC树脂偶联的繁琐步骤，然而，在Fmoc-Thr-x与AM树脂 合成的过程中，由于Fmoc-Thr-x相对Fmoc-Thr-ol空间位阻更大，会导致后续偶联效偏低， 导致奥曲肽成品纯度不高、收率不高。

发明内容

针对上述现有技术中存在的合成工艺不适合大规模工业化生产、奥曲肽纯度不高、收率 低等问题，本发明提供了一种肽的固相合成方法，以AM树脂或MBHA树脂为固相载体， 以linker-A作为连接固相载体与目标肽的衔接物。该技术与现有的技术相比，通过在固相载 体与目标肽之间引入linker-A，大大优化了目标肽固相成环的空间环境，有效降低了固相合 成中存在的空间位阻效应。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：