[发明专利]Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用

权利要求书

1.一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针，其特征在于：包括以下两组引物对和探针：

(1)Salivirus病毒特异性引物对和探针：

Salivirus病毒特异性上游引物，其序列如SEQ ID NO.1所示；

Salivirus病毒特异性下游引物，其序列如SEQ ID NO.2所示；

所述Salivirus病毒特异性探针的序列如SEQ ID NO.5所示；所述Salivirus病毒特异性探针的序列5’端连接有一个荧光报告基团FAM，3’端连接有一个荧光猝灭基团BQ1；和，

(2)内参基因Rnase P特异性引物对和探针：

Rnase P基因特异性上游引物，其序列如SEQ ID NO.4所示；

Rnase P基因特异性下游引物，其序列如SEQ ID NO.3所示；

所述Rnase P基因特异性探针的序列如SEQ ID NO.6所示；所述Rnase P基因特异性探针的序列5’端连接有一个荧光报告基团HEX，3’端连接有一个荧光猝灭基团BQ1。

2.一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光定量PCR检测引物对与探针。

3.根据权利要求2所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：

阳性对照品：Salivirus病毒标准品；

内标溶液：含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；

阴性对照品：RNase Free H₂O。

4.一种如权利要求1所述Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针在制备同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒试剂上的应用。

5.一种如权利要求2或3所述Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测试剂盒在制备同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒试剂上的应用。

6.如权利要求4所述Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针在制备同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒试剂上的应用，其特征在于：Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测方法，是利用权利要求1所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针进行双通道实时荧光PCR扩增，包括如下步骤：

(1)从样品中提取RNA为模板；

(2)配制扩增反应体系进行双通道实时荧光PCR扩增得到扩增曲线，所述扩增反应体系包括所述步骤(1)中的模板、以及权利要求1所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对和探针；

(3)对所述扩增曲线进行分析，并作出判断。

7.如权利要求6所述Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针在制备同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒试剂上的应用，其特征在于：所述步骤(2)中扩增反应体系具体包括：权利要求1所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对和探针、5×PCR Buffer和Enzyme Mix；扩增程序为：40℃15min；95℃5min；94℃15sec、60℃30sec，45个循环。

8.如权利要求6或7所述Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对与探针在制备同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒试剂上的应用，其特征在于：所述步骤(3)中具体判断规则为：

当FAM荧光通道中Ct≤40时，HEX荧光通道有或无扩增曲线时，判断样品为Salivirus病毒阳性；

当FAM荧光通道中40Ct≤45时，HEX荧光通道有或无扩增曲线时，重复一次实验，如果FAM荧光通道Ct还是在此范围之内或小于等于40就判断样品为Salivirus病毒阳性，否则判断样品为Salivirus病毒阴性；

当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX荧光通道中Ct≤45时，判断样品为Salivirus病毒阴性；

当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需重新提取标本RNA和重新扩增。