[发明专利]Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用

说明书

本发明公开了一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用。本发明采用一对Salivirus病毒特异性的扩增引物序列，并通过荧光探针定量检测Salivirus病毒的RNA。同时采用人内源性Rnase P基因作为内参基因，采用Rnase P特异性引物和探针检测标本中内参基因RNA。本发明采用单管双荧光通道同时检测Salivirus病毒和内参基因Rnase P的存在，能检测标本中Salivirus病毒RNA的存在。在病毒定性分析的同时还能定量分析，定量线性范围好；特异性高，准确率高，重复性好，精密度高，能通过内参基因的检测结果对样本的提取和扩增整个过程进行质量监控。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体是指一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用。

背景技术

Salivirus病毒是属于小核糖核酸病毒科、Salivirus病毒属的唯一成员，是2009年被发现的一种新型致人疾病的RNA病毒。Salivirus病毒目前发现能引起人胃肠炎。Salivirus目前有两种型别，分别是Salivirus 1型和Salivirus 2型。当前还没有针对Salivirus病毒核酸的检测试剂盒和方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用，更够快速、准确且灵敏地同时检测出Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒，特异性强、灵敏度高。

为实现上述目的，本发明的方案如下：

本发明的目的之一在于提供一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对和探针，包括Salivirus病毒特异性引物对和探针，内参基因Rnase P特异性引物对和探针；

所述Salivirus病毒特异性引物对包括：Salivirus病毒特异性上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，Salivirus病毒特异性下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述Salivirus病毒特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示，所述Salivirus病毒特异性探针的序列5’端连接有一个荧光报告基团FAM，3’端连接有一个荧光猝灭基团BQ1。

所述内参基因Rnase P特异性引物对包括：Rnase P基因特异性上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，Rnase P基因特异性下游引物序列如SEQ ID NO.5所示；所述Rnase P基因特异性探针序列如SEQ ID NO.6所示，所述Rnase P基因特异性探针的序列5’端连接有一个荧光报告基团HEX，3’端连接有一个荧光猝灭基团BQ1。

本发明的目的之二在于提供一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括所述的双通道实时荧光PCR检测引物对和探针。

优选地，所述试剂盒还包括：阳性对照品：Salivirus病毒标准品；内标溶液：含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；阴性对照品：RNase Free H₂O。

本发明的目的之三在于提供所述的双通道实时荧光PCR引物对和探针、所述的试剂盒在用于同时检测Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒上的用途。需要说明的是本发明提供的试剂盒可以同时检测出Salivirus 1型和Salivirus 2型病毒，但不进行Salivirus1型和Salivirus 2型病毒的分型；若样本中检测出Salivirus病毒阳性即表明样本中至少含有Salivirus 1型或Salivirus 2型病毒中的一种。

本发明的目的之四在于提供一种Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测方法，利用所述的Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对和探针进行双通道实时荧光PCR扩增。

具体地，所述方法包括如下步骤：