[发明专利]一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物

说明书

本发明涉及一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素‑大分子载体偶联复合物，所述凝集素‑大分子载体偶联复合物包括：大分子载体；和偶联在大分子载体外侧的凝集素。本发明提供的凝集素‑大分子载体偶联复合物可以简便、快速、精准分离临床样本中的糖基化外泌体，分离效率高，重复性好，分离后的外泌体形态完整，无破裂或碎裂，可直接用于糖基化外泌体液体检测，或直接进行免疫学相关检测，或直接提取外泌体内相关核酸进行基因检测分析。

技术领域

本发明属于生物医药及生物分离相关的技术领域，涉及一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物。

背景技术

外泌体是细胞多泡内体与质膜融合时释放产生的具有生物活性的微小囊泡，其直径约为30～150nm，是细胞间通讯的重要介质之一；在人健康的生理情况下，外泌体可以在细胞之间运送DNA、蛋白质、mRNA、miRNA等多种生物活性物质，参与细胞通讯、细胞迁移、肿瘤细胞增长等多种过程，完成细胞间物质及信息的传递。文献研究发现，几乎所有类型的细胞均会分泌外泌体，并且在血液、唾液、尿液、脑脊液、积液和乳汁等体液中都能够提取到外泌体。

外泌体与肿瘤、慢性感染性疾病、自身免疫病等很多疾病相关，当机体发生病变时，细胞分泌的外泌体的成分、含量、性质等都可能发生改变；糖基化外泌体在包括肿瘤在内的多种疾病的发生、发展过程中均有着重要作用，外泌体的检测研究能有效监测疾病的发生、发展；由于外泌体在样本中含量比较低，外泌体的分离富集对外泌体的研究至关重要。

目前，外泌体的分离方法很多，主要有：超速离心法或梯度密度离心法，免疫磁珠法等。其中：超速离心法或梯度密度离心法是基于外泌体与其他生物组份密度的微小差异进行分离，该方法需要特殊设备，样品需求量比较大，耗时长，且因为不同临床样本的特点不同，采用该方法的分离效果稳定性差，进一步地超速离心还容易造成囊泡损伤从而影响后续实验；免疫磁珠法的原理是外泌体表面的特异性蛋白如：CD9/CD63/CD81等与包被有对应抗体的免疫磁珠相结合，进行磁分离，但由于免疫磁珠体积较小，粒径为纳米级别且小于等于外泌体的直径，因此免疫磁珠与外泌体结合的空间位阻较大，外泌体结合不充分，分离效率不高。此外，采用免疫磁珠法分离获得的外泌体因为洗脱时使用酸性洗脱液进行洗脱，导致外泌体形态不完整。

因此，一种能用于精准、高效分离富集样本中的糖基化外泌体的组合物、分离装置及分离方法的研究建立是必须的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物，本发明还提供了一种含有该凝集素-大分子载体偶联复合物的糖基化外泌体分离组合物，以及使用该凝集素-大分子载体偶联复合物进行糖基化外泌体分离的方法及应用。本发明提供的凝集素-大分子载体偶联复合物可以精准分离临床样本中的糖基化外泌体，分离效率高，分离后的外泌体形态完整，无破裂或碎裂，可直接用于糖基化外泌体液体检测，或直接进行免疫学相关检测，或直接提取外泌体内相关核酸进行基因检测分析。本发明提供的糖基化外泌体分离的方法中，利用外泌体外表面丰富的糖链可以和凝集素结合的原理，采用有效地离心清洗及有效地洗脱方法可以分离糖基化外泌体，并且非常简便、快速，重复性好，分离后的外泌体形态完整，无破裂或碎裂，将其应用于疾病的发生、发展等过程中检测、监控及诊断。

本发明提供了一种用于分离临床样本中的糖基化外泌体的凝集素-大分子载体偶联复合物，大分子载体；和偶联在大分子载体外侧的凝集素；其中：

所述凝集素包括：木菠萝凝集素、花生凝集素、豌豆凝集素(VVA和/或VVL)、刀豆凝集素、小扁豆凝集素、麦胚素、大豆凝集素、芸豆凝集素、蜗牛凝集素(HAA和/或HPA)中的任意一种或者两种及以上；

所述大分子载体包括：葡聚糖微球、琼脂糖微球、树脂或环氧树脂微球、聚苯乙烯微球中的任意一种或者两种及以上。