[发明专利]检测绵羊肺炎支原体的实时荧光RAA引物和探针、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种检测绵羊肺炎支原体的实时荧光RAA引物和探针，其特征在于：所述引物的序列为：

上游引物：5′-TGAGTAACACGTACCTAACCTACCTTTTGGAC-3′；

下游引物：5′-TGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTATCTC-3′；

所述探针的序列为：5′-TTGGTAGGGTAAAGGCCTACCAAGACGATGAT-THF-TTTAGCGGGGCCAAGAG-3′。

2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于：所述探针序列中THF的5′端一侧与其最接近的T碱基上标记荧光基团，THF的3′端一侧与其最接近的T碱基上标记淬灭基团；对所述探针序列的3′末端进行封闭修饰。

3.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于：所述荧光基团为FAM，所述淬灭基团为BHQ1，所述封闭修饰为C3-spacer修饰；经过所述标记和修饰的探针为5′–TTGGTAGGGTAAAGGCCTACCAAGACGATGA/FAM-dT/-THF-/BHQ1-dT/TTAGCGGGGCCAAGAG-C3-sapcer-3′。

4.一种检测绵羊肺炎支原体的实时荧光RAA试剂盒，其特征在于：包含权利要求1-3任一项所述的引物和探针。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：还包括荧光基础缓冲液、醋酸镁溶液、RAA冻干粉和去离子水。

6.权利要求5所述的检测绵羊肺炎支原体的实时荧光RAA试剂盒的使用方法，其特征在于：具体操作为：提取待测样品的基因组为模板，用所述试剂盒进行RAA扩增，并在扩增过程中进行实时荧光检测。

7.如权利要求6所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述RAA扩增体系包括以下试剂及用量：

8.如权利要求7所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述RAA扩增体系的扩增条件为：37-40℃，15-20min。

9.如权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述RAA扩增体系的扩增条件为：39℃，20min。