[发明专利]一种用于构建幼畜心肌炎细胞模型的细胞系及构建方法

说明书

本发明公开了一种用于幼畜心肌炎细胞模型的细胞系，属于生物医学技术领域。所述细胞系为豚鼠心肌细胞，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201932。同时提供了一种利用该细胞系建立口蹄疫病毒致幼畜心肌炎细胞模型的方法。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：本发明的细胞模型建立方法具有很好的重复性，在口蹄疫病毒易感试验动物——豚鼠心肌原代细胞获得后，可以直接使用口蹄疫病毒感染心肌原代细胞模型，进而在细胞水平和分子水平上对口蹄疫病毒对幼畜心肌炎致病机制进行深入研究。具有经济、省时、表现均一，且重复性好的优点。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，更具体的说是涉及一种用于构建幼畜心肌炎细胞模型的细胞系及构建方法。

背景技术

口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouthdisease virus,FMDV)感染动物引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。反刍动物、猪及超过70多种野生动物都易感FMDV，由于其传播速度快、感染性强，造成严重的经济和社会问题。

FMDV除引起偶蹄动物蹄、唇部水泡外还可引起幼畜的急性死亡，其致幼畜死亡的最主要原因是急性心肌炎。FMDV感染幼畜心脏致使心肌变性、坏死而出现灰白色或淡灰色斑点和条纹(又称虎斑心)多不表现出FMD特有的临床症状而急性死亡。在兽医临床上常见仔猪、羔羊和育肥牛因感染FMDV导致急性心肌炎而大批死亡的病例报道。

FMDV感染幼畜后导致心肌炎，但国内外关于口蹄疫病毒致幼畜心肌炎的致病机制研究都停留在组织水平。病毒感染引起心肌炎的发病机制尚不明确，目前普遍认为病毒性心肌炎，致病机制主要为：(1)病毒对心肌直接损伤；(2) 心肌细胞感染病毒后免疫损伤；(3)病毒感染细胞所致的心肌细胞凋亡。而关于FMDV致幼畜心肌炎致病机制细胞水平和分子水平的研究至今仍是空白。其原因主要是口蹄疫病毒致幼畜心肌炎细胞模型的建立存在困难，构建的细胞模型个体差异大、批次间差异大、对病毒不敏感，使研究心肌炎致病分子机制受到了限制。通常认为,成熟的心肌细胞是终末分化型细胞,不具备有丝分裂能力。成年动物心肌细胞中约有15％～20％较年轻的心肌细胞,保留着增殖的能力。但心肌细胞增殖潜能的大小尚未知晓,缺乏形态学和生物学资料，心肌细胞不易培养。

因此，提供一种差异小、对病毒敏感的构建幼畜心肌炎细胞模型的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种用于构建幼畜心肌炎细胞模型的细胞系及构建方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种豚鼠心肌细胞系，所述细胞系为豚鼠心肌细胞系，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间为2019年3月1 日，保藏编号为CCTCC NO：C201932，分类命名为豚鼠心肌细胞GPCM(Guinea pig Cardiomyocyte GPCM)。

豚鼠心肌细胞系在构建幼畜心肌炎细胞模型中的应用。

本发明所述豚鼠心肌细胞，可以直接使用口蹄疫病毒感染心肌原代细胞模型，进而在细胞水平和分子水平上对口蹄疫病毒对幼畜心肌炎致病机制进行深入研究。具有经济、省时、表现均一，且重复性好的优点。

优选的，包括如下步骤：

(1)向权利要求1所述细胞系中接种口蹄疫病毒，25cm²/瓶接种口蹄疫病毒液1毫升，吸附10～30分钟后加心肌细胞培养基CMM，调pH至7.0～7.2，之后加入加青霉素、链霉素各100IU/ml，于37℃、5％CO₂浓度培养箱中进行培养；

(2)经步骤(1)培养至细胞病变达到75％以上时，置-20℃反复冻融两次，待无菌检验、支原体检验、外源病毒检验合格后，幼畜心肌炎细胞模型构建完成。