[发明专利]一种抗阿尔兹海默病候选化合物的血药浓度检测方法

说明书

一种抗阿尔兹海默病候选化合物的血药浓度检测方法，包括以下步骤：(1)在给予ZCY‑15灌胃后的SD大鼠血浆中，加入乙腈和内标工作液，混合涡旋，离心，之后提取上清液进样；(2)采用高纯球形硅胶微粒作为填充剂的色谱柱，柱温：40℃；超高液相系统采用通用型二元高压泵和进样器，选取乙腈‑醋酸铵水溶液的混合液作为流动相，梯度洗脱；(3)采用ESI离子源作为离子源，多反应监测模式(MRM)进行正离子模式检测。定量分析的离子分别为：ZCY‑15：m/z313.2→163.1，碰撞能量为29eV，IS：m/z237→194.1，碰撞能量为25eV。本测定方法具有专属性强，灵敏度高，样品取样量小，预处理简单快捷，测定迅速准确，分析周期短等优点，特别适用SD大鼠血浆中ZCY‑15的血药浓度检测和药代动力学研究。

技术领域

本发明涉及药物分析学临床前药代动力学研究范畴，尤其涉及一种SD大鼠血浆中抗阿尔兹海默病候选化合物ZCY-15的血药浓度定量分析方法。

背景技术

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体，是离子型谷氨酸受体的一个亚型，分子结构复杂，药理学性质独特，不仅在神经系统发育过程中发挥重要的生理作用，而且对神经元回路的形成亦起着关键的作用，是目前已知的治疗阿尔茨海默症的重要作用靶点，美金刚是唯一作用于NMDA受体的上市药物，但不良反应较多。 ZCY-15是一个全新合成的作用于NMDA受体的化合物，其体外药效学实验表明 ZCY-15的药物活性媲美且略优于美金刚。

化合物ZCY-15的制备方法参阅申请日为2017-08-23，申请号为 201710728442.1，专利名称为“N-(3,5-二甲基金刚烷-1-基)-N’-取代苯基脲类化合物及其制备方法和用途”的发明专利。从该专利文中可知，ZCY-15的化学名称为 N-(3,5-二甲基金刚烷-1-基)-N’-(3-甲基苯基)脲，化学结构式见图1。

因为ZCY-15是创新性化合物，其生物样品的测定方法国内外均无文献报道，为能够开展关于其体内吸收、分布、代谢、排泄等相关特征的动物及人体药代动力学研究，有必要建立一个高灵敏度、快捷方便的ZCY-15血药浓度定量分析方法。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种操作简单快捷、样本剂量小、专属性强、准确度高、重现性好、分析时间短、峰形好及色谱保留时间合适的一种抗阿尔兹海默病候选化合物的血药浓度检测方法。

本发明采用的技术方案是：

一种抗阿尔兹海默病候选化合物的血药浓度检测方法，其方法样品为采自SD大鼠的血浆，化合物ZCY-15为检测对象；所述方法是血浆样品经预处理后，在混合流动相梯度洗脱下，通过色谱柱分离，之后采用二级质谱检测器检测；具体步骤如下：

步骤一：血浆样品预处理；给予ZCY-15灌胃后的SD大鼠血浆中，加入乙腈和内标工作液，混合涡旋，离心，之后提取上清液，与流动相溶液混匀进样；

步骤二：样品分离；采用高纯球形硅胶微粒作为填充剂的Aqela Venusil ASB C8 色谱柱(2.1×50mm，3μm)，柱温：40℃；超高液相系统采用通用型二元高压泵和进样器，选取乙腈-醋酸铵水溶液的混合液作为流动相，梯度洗脱；

步骤三：二级质谱仪检测样品；采用ESI离子源作为离子源，多反应监测模式 (MRM)进行正离子模式检测；定量分析的离子分别为：ZCY-15：m/z313.2→163.1，碰撞能量为29eV，IS：m/z237→194.1，碰撞能量为25eV；

进一步，所述血浆样品采于周龄为7～9周、体重为210±30g的健康成熟SD大鼠；经眼眶后静脉丛取血250μL，高速离心之后取上清液制成；取样量为80μL；

进一步，步骤(1)中，所述乙腈为色谱级溶液，其作用是沉淀血浆样品中的蛋白质成分；