[发明专利]一种同时检测CYP2C9和VKORC1基因的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种同时检测双位点基因的检测试剂盒，其特征在于，包括CYP2C9基因A1075C位点和VKORC1基因-1639GA位点的扩增引物组、限制酶和PCR试剂；

其中，CYP2C9基因A1075C位点和VKORC1基因-1639GA位点的扩增引物序列为：

CYP2C9基因A1075C位点外侧引物对：

F1：GTGTTATTATTGATAAGTAAGGACTTACCCA；

R1：TAGCAAAGTTGACAGATTAACATCATCAGA；

CYP2C9基因A1075C位点内侧引物对：

F2：CTTCCTGTCTTCCTTTATTGAAGAGAATTTTCTCCACT；

R2：GTAAATGAATTTTCTGTAGTAGGTGGGGAGAAGGTCCA；

VKORC1基因-1639GA位点外侧引物对：

F3：CACACTCTCTAGAAGAGAGTAGATGTGAG；

R3：GGGCCAGATGAGGTCTCTCC；

VKORC1基因-1639GA位点内侧引物对：

F4：CTCTCTAGAAGAGAGTAGATGTGAGAAACAGCATCTGGA；

R4：GTCTTAAACTCCTGACCTCAAGTGATCCACCCACCTGG；

限制酶为限制性核酸内切酶Mva I或其同裂酶。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒检测方法包括以下步骤：

1)采集样品；

2)使用外、内引物对进行PCR扩增；

3)对PCR产物进行酶切；

4)根据酶切产物电泳条带，确定多态性位点基因型。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，步骤4)中所述确定多态性位点基因型的方法，具体步骤为：鉴定完全酶切后的特征性电泳条带；

其中，CYP2C9基因A1075C位点的特征性电泳条带为142.5bp和105bp条带；

VKORC1基因-1639GA位点的特征性电泳条带为216.5bp和171.5bp条带。

4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，步骤1)中所述样品选自细胞样品和DNA样品。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述细胞样品选自口腔上皮细胞、血液细胞、尿道上皮细胞和肠道上皮细胞。

6.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增条件为：94℃、4～8min预变性；94℃、30s变性，52～58℃、30s退火，72℃、15～40s延伸，30～35个循环；72℃、5min末次延伸。

7.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，步骤4)中所述酶切产物电泳选用2～3％的琼脂糖凝胶电泳和5～12％聚丙酰胺凝胶电泳。

8.权利要求1所述的检测试剂盒在制备指导华法林用药试剂盒中的应用。

9.一种指导华法林用药的系统，包括样品采集装置和检测分析装置，其特征在于：

所述检测分析装置包括如权利要求1所述的检测试剂盒。

10.根据权利要求9所述的指导华法林用药系统在制造INR联合检测指导血液抗凝患者用药系统中的应用。