[发明专利]血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法有效
| 申请号： | 202010063680.7 | 申请日： | 2020-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN111153985B | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 夏杰;王剑;王民燕;普筱薇;叶浩威 | 申请（专利权）人： | 宁波赛珀生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/775 | 分类号： | C07K14/775;C07K1/20 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 王学芝 |
| 地址： | 315033 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清 脂蛋白 ii 分离 纯化 方法 | ||
1.血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，包括有以下步骤：
1)利用疏水层析填料对血清中的载脂蛋白A-II成分进行初步提纯，用不含盐的缓冲液洗杂，用含有有机醇的缓冲液洗脱并收集含A-II载脂蛋白的洗脱液；
2)利用阴离子交换层析填料对步骤1)中收集的含A-II载脂蛋白的洗脱液进行精细提纯，用含有去污剂和有机醇的缓冲液对载脂蛋白A-II进行柱上脱脂。
2.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，疏水层析填料为Phenyl Sepharose High Performance。
3.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，疏水层析初步提纯的过程包括平衡、上样、洗杂、洗脱。
4.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，不含盐的缓冲液为pH 7.4的20mM Tris-HCl缓冲液。
5.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，含有有机醇的缓冲液为30—50％的pH 7.4的20mM Tris-HCl缓冲液。
6.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)中，阴离子交换层析填料为Q Sephrose HP。
7.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)中，利用阴离子交换层析填料对步骤1)中收集的含A-II载脂蛋白的洗脱液进行精细提纯过程包括平衡、上样、脱脂、再平衡、洗脱。
8.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤2)中，含有去污剂和有机醇的缓冲液为含有0.5％的去污剂，30—50％的有机醇的pH 7.4的20mM Tris-HCl缓冲液。
9.根据权利要求8所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述去污剂为曲拉通X-100和聚多卡醇。
10.如权利要求8中所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述有机醇为乙二醇。
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