[发明专利]含养殖环境噬菌体组合物的喷雾消毒剂、其制备方法和应用

权利要求书

1.含养殖环境噬菌体组合物的喷雾消毒剂，其特征在于，包含总浓度大于10¹⁰PFU/mL的噬菌体或其组合物和猪链球菌裂解酶LY7917，且所述噬菌体或其组合物和所述猪链球菌裂解酶LY7917的体积比为0.1～100:1；其中：

所述噬菌体来源于养殖环境，且选自大肠杆菌噬菌体Ecp2、大肠杆菌噬菌体E20-1或金黄色葡萄球菌噬菌体SLPW中的一种或两种以上组合。

2.根据权利要求1所述的喷雾消毒剂，其特征在于，所述猪链球菌裂解酶LY7917的浓度为100.0μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的喷雾消毒剂，其特征在于，所述噬菌体组合物中不同的噬菌体按照等体积比混合。

4.根据权利要求1所述的喷雾消毒剂，其特征在于，所述喷雾消毒剂的喷雾粒径小于100μm。

5.根据权利要求1至4任一项所述的喷雾消毒剂，其特征在于，所述喷雾消毒剂的喷雾粒径为30～40μm。

6.权利要求1至5任一项所述喷雾消毒剂的制备方法，其特征在于，通过总浓度大于10¹⁰PFU/mL的噬菌体溶液或其组合物和所述猪链球菌裂解酶LY7917溶液按体积比为0.1～100:1混合均匀得到；其中，

所述噬菌体溶液的制备方法为：

(a)将分离于养殖环境中的噬菌体纯化后，与BHI培养基或LB培养基混匀，加入适量的对应宿主指示菌，于37℃、160rpm震荡培养10h，再于4℃、5000rpm离心20min，收集上清并用0.22μm滤膜过滤，得到高价噬菌体悬液；

(b)再将上述悬液纯化，在0.01～1MOI接种于过夜培养的对应宿主菌中，均匀混合，室温放置15min，加入LB液体培养基或BHI液体培养基至100mL，37℃、150rpm恒温培养至宿主菌裂解澄清，取出，12000rpm离心10min，将上清液经0.22μm滤膜除菌过滤，收集滤液，得到所述噬菌体溶液；

所述猪链球菌裂解酶LY7917溶液的制备方法为：

(1)取10mL隔夜培养的猪链球菌裂解酶LY7917阳性克隆菌转接至1L含50μg/mLKan的LB液体培养基瓶中，37℃、180rpm恒温振荡培养2～4h，至菌液OD₆₀₀为0.6～1.0；

(2)加入10mL浓度为100mmol/L的表达诱导剂IPTG到终浓度为1mmol/L，37℃、170rmp恒温振荡培养4h，IPTG诱导后表达菌1L使用pH7.210mM的PBS洗涤后，于4℃、4800rpm离心30min，将沉淀溶于20mL pH7.4预冷的裂解缓冲液Binding buffer，冰浴超声破碎，超声功率200W，工作5s，间隔15s，循环150次；

(3)破碎后的细菌悬浮物于4℃、10000rpm离心10min，弃沉淀取上清，以0.45μm滤器过滤，滤液纯化，得到酶活单位为80.0μg/mL的猪链球菌裂解酶LY7917溶液。

7.权利要求1至5任一项所述喷雾消毒剂在动物养殖环境杀菌消毒中的应用。

8.根据权利要求7所述喷雾消毒剂的应用，其特征在于，所述喷雾消毒剂的使用方法为：将权利要求1至5任一项所述喷雾消毒剂通过35μm喷嘴，在工作压力为40Kg/cm²的条件下均匀喷雾于待消毒的动物养殖环境内。

9.根据权利要求8所述喷雾消毒剂的应用，其特征在于，所述待消毒的动物养殖环境包括畜舍地面、空气和饲槽。

10.根据权利要求9所述喷雾消毒剂的应用，其特征在于，保持所述喷嘴与所述畜舍地面或所述饲槽相距15cm且成45度角。