[发明专利]一种用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系、制备方法及其应用在审
| 申请号： | 202010066072.1 | 申请日： | 2020-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN111154725A | 公开（公告）日： | 2020-05-15 |
| 发明（设计）人： | 沈国民;刘红丽;曹青;沈滟;高蒙;席守民;李三强 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/62;C12N15/85;C12N15/65;C07K19/00;C12Q1/02;C12R1/91 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 471003 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 筛选 维生素 循环 分子 抑制剂 报告 基因 细胞 体系 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系，其特征在于：所述双报告基因细胞体系中含有同时表达FIX-Gla-PC融合基因和报告基因的质粒，所述FIX-Gla-PC融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系，其特征在于：所述双报告基因细胞体系的宿主细胞为人胚肾细胞293Trex。
3.根据权利要求1所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系，其特征在于：所述FIX-Gla-PC融合基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系，其特征在于：所述报告基因为甲虫荧光素酶报告基因，甲虫荧光素酶报告基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系，其特征在于：所述同时表达FIX-Gla-PC融合基因和报告基因的质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
6.如权利要求1-5中任一项所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将同时表达FIX-Gla-PC融合基因和报告基因的质粒转入宿主细胞中，即得。
7.如权利要求1-5中任一项所述的用于筛选维生素K循环小分子抑制剂的双报告基因细胞体系在筛选特异性靶向维生素K循环的小分子抑制剂方面的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述应用为：将待选小分子化合物加入到含有维生素K的双报告基因细胞体系培养液中进行培养，筛选出抑制维生素K循环的小分子化合物，作为特异性靶向维生素K循环的小分子抑制剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述双报告基因细胞体系培养液的培养基为含双抗的完全培养基，双抗分别为青霉素和链霉素。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述双报告基因细胞体系培养液中维生素K的浓度为1～20μmol/L。
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