[发明专利]一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法

说明书

本发明公开了一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基；菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液；基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基；菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养，本发明设计合理，能够快速大量地进行芽孢杆菌的发酵培育，且芽孢杆菌活性较高，大大提高了芽孢杆菌的发酵效率以及发酵质量。

技术领域

本发明涉及菌种培养技术领域，尤其涉及一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法。

背景技术

芽孢杆菌属，细菌的一属，能形成芽孢。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。芽孢杆菌属细菌较大，革兰氏阳性、是严格需氧或兼性厌氧的有荚膜的杆菌。该属细菌的重要特性是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽孢。芽孢杆菌属可分为以下亚群：多黏芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌（包括蜡样芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌）、短芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌。芽孢杆菌具有耐高温、快速复活和较强分泌酶等特点，在有氧和无氧条件下都能存活。在营养缺乏、干旱等条件下形成芽孢，在条件适宜时又可以重新萌发成营养体。

但是现有的芽孢杆菌在发酵培育的过程中，芽孢杆菌的繁殖率不高，并且芽孢杆菌在发酵培育的过程中，芽孢杆菌出现了失活现象，大大降低了芽孢杆菌的发酵培育效率，存在一定的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述问题，提供一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，能够大量快速地进行芽孢杆菌的繁殖培育，提升芽孢杆菌的发酵培育效率。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现：

一种固体发酵凝结芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：

S100、菌种培养活化：在无菌操作下，用无菌微量吸管，从已溶解的管中吸取50μL的菌液，滴入固态指定培养基边缘附近，以划线法接种于培养基；

S200、菌种接种繁殖：将活化后的芽孢杆菌溶液转接到液体培养基上进行接种繁殖，传代繁殖2~3次，获取芽孢杆菌的种子液；

S300、基体消毒灭菌：将用于固态发酵的固体培养基放入到高温灭菌箱内进行消毒灭菌，获取纯净健康的固态培养基；

S400、菌种固体发酵：将芽孢杆菌的种子液接种到灭菌后的固态培养基上，并在35~45摄氏度的无菌环境下进行发酵培养。

优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S100中，固态指定培养基为为固体琼脂板。

优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，菌种接种繁殖在振动环境下进行，且菌种接种繁殖的振动频率为10~30Hz。

优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，菌种接种繁殖过程中监测液体培养基的pH，并调节pH保持在6.8~7.2。

优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S200中，液体培养基成分及百分比含量为：

胰蛋白胨： 0.5~0.8%；

酵母膏： 1.5~2.0%；

磷酸氢二钾： 0.3~0.5%；

葡萄糖： 0.2~0.5%；

蒸馏水： 余量。

优选地，上述固体发酵凝结芽孢杆菌的方法中，步骤S300中，固体培养基成分及百分比含量为：