[发明专利]一种基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法在审
| 申请号： | 202010071284.9 | 申请日： | 2020-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN111849970A | 公开（公告）日： | 2020-10-30 |
| 发明（设计）人： | 刘巧泉;黄李春;李钱峰;张昌泉;范晓磊 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 直链 淀粉 含量 稻米 培育 筛选 方法 | ||
1.一种基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，包括步骤：对稻米Wx基因启动子进行改造。
2.如权利要求1所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
a.对稻米Wx基因启动子进行改造时，所针对的靶序列如SEQ ID NO：1-7任一所示；
b.所述稻米选自水稻。
3.如权利要求2所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，对稻米Wx基因启动子进行改造时，采用CRISPR系统对稻米Wx基因启动子中的靶序列进行编辑。
4.如权利要求3所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，包括如下步骤：
(1)利用CRISPR系统根据稻米Wx基因启动子序列设计gRNA；
(2)构建含有gRNA片段的中间载体；
(3)利用步骤(2)所述的中间载体构建含有gRNA片段的CRISPR/Cas9载体；
(4)利用步骤(3)所述的CRISPR/Cas9载体获得转基因苗；
(5)培养并筛选步骤(4)所述的转基因苗，获得突变植株。
5.如权利要求4所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
a.所述中间载体选自质粒载体；
b.所述CRISPR/Cas9载体选自pC1300-Cas9载体。
6.如权利要求5所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，所述中间载体选自pBlueScript(SK+)载体。
7.如权利要求4所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，步骤(4)包括以下步骤：
(41)将步骤(3)所述的CRISPR/Cas9载体转入到宿主细胞中；
(42)利用宿主细胞侵染稻米，获得转基因苗。
8.如权利要求4所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，步骤(5)包括以下步骤：
(51)提取步骤(4)获得的转基因苗的DNA，用引物SEQ ID NO：22-29进行扩增，测序；
(52)将有突变的植株进一步种植，筛选纯合株系，去除转基因痕迹，经过多代筛选，获得纯合突变植株。
9.如权利要求7所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，所述宿主细胞选自工程菌。
10.如权利要求9所述的基于直链淀粉含量的稻米培育筛选方法，其特征在于，所述宿主细胞选自EHA105菌株。
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