[发明专利]ant(3″)-Ia基因的LAMP试剂盒及其专用引物

权利要求书

1.一种用于检测ant(3″)-Ia基因的环介导等温核酸扩增引物组合，其特征在于：其序列如SEQ ID NO：1～6所示。

2.一种用于检测ant(3″)-Ia基因的环介导等温核酸扩增试剂盒，其特征在于：它包括序列如SEQ ID NO：1～6所示的引物。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，它还包括：

1)反应缓冲液；

2)DNABst聚合酶；

所述反应缓冲液包括如下配比的组分：

40摩尔份的Tris-HCl、50摩尔份的KCl、16摩尔份的MgSO₄、20摩尔份的(NH₄)₂SO₄、1600摩尔份的甜菜碱、0.2体积份的Tween-20；

当体积份为L时，摩尔份为mmol。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中的缓冲液还含有dNTPs。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述dNTPs中包括2.8摩尔份的dATP、dGTP、dTTP和dCTP。

6.如权利要求2～5任一所述的试剂盒，其特征在于，它还包括：

含有ant(3″)-Ia基因的DNA，作为阳性对照。

7.如权利要求2～6任一所述的试剂盒，其特征在于：所述反应缓冲液为2倍浓度母液，其中含有：40mM Tris-HCl，50mM KCl，20mM(NH₄)₂SO₄，0.1％Tween-20，1.6M甜菜碱，16mMMgSO₄，2.8mM dATP、2.8mM dGTP、2.8mM dTTP和2.8mM dCTP，80μM SEQ ID NO：1，80μM SEQID NO：2所示引物，10μM SEQ ID NO：3，10μM SEQ ID NO：4所示引物，20μM SEQ ID NO：5，20μM SEQ ID NO：6所示引物。

8.一种检测ant(3″)-Ia基因的环介导等温核酸扩增方法，其特征在于：它是使用权利要求2～7任一所述试剂盒进行环介导等温核酸扩增检测的方法。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A.1μL待检基因组模板DNA、1μL BstDNA聚合酶、LAMP引物组、缓冲液混匀，加水补充成25μL体系；

B.于恒温金属浴上65℃放置1小时；

C.将金属浴调到80℃中止反应，20min后取出；

步骤A中所述体系中含有20mM Tris-HCl，25mM KCl，10mM(NH₄)₂SO₄，0.1％Tween-20，0.8M甜菜碱，8mM MgSO₄，1.4mM dATP、1.4mM dGTP、1.4mM dTTP和1.4mM dCTP，0.32U BstDNA聚合酶，40μM SEQ ID NO：1，40μM SEQ ID NO：2所示引物，5μM SEQ ID NO：3，5μM SEQID NO：4所示引物，10μM SEQ ID NO：5，10μM SEQ ID NO：6所示引物。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，它还包括：使用电泳和/或荧光染料来显示扩增结果；

优选地，所述荧光染料为Green I。