[发明专利]一种采用聚唾液酸发酵液制备唾液酸的方法

说明书

本发明公开了一种采用聚唾液酸发酵液制备唾液酸的方法，包括步骤：1)取大肠埃希氏菌发酵液，加热升温至65～95℃，调节pH至1.0～3.5，进行水解反应，得到水解液；2)取步骤1)所得水解液，经过滤、浓缩、结晶、烘干，得到所述唾液酸。该方法相比现有技术更简单，所制备的唾液酸纯度高，产率更高。

技术领域

本发明涉及唾液酸制备技术领域，尤其是一种采用聚唾液酸发酵液制备唾液酸的方法。

背景技术

唾液酸(sialic acid，SA)是一类酸性氨基糖，在脊椎动物体内，唾液酸由肝脏合成，以聚合物、复合物形式结合在细胞表面，对于大脑发育、免疫调节、抗菌抗病毒、抗氧化和美白、肠道菌群定植等具有重要作用。动物乳中含有大量的唾液酸，其中人乳中的唾液酸含量在初乳中可以达到1.5g/L或更高，唾液酸对幼儿发育尤其重要。对缺乏唾液酸的人群，适量补充外源唾液酸非常必要。

人体自身合成的唾液酸均为N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid，NeuAc)，NeuAc分子中具有吡喃糖结构，分子式为C₁₁H₁₉NO₉，全名是5-氨基-3,5-二脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖，分子量为309.3，极易溶于水，而不易溶于乙醇等有机溶剂，在水溶液中呈现酸性，2％的水溶液pH约为1.8～2.3。燕窝中含有丰富NeuAc，干重含量可达到5％～10％，因此，燕窝是传统的滋补佳品。NeuAc的体内合成路径明确，目前已经可以利用重组菌来生产NeuAc合成的关键酶，进而合成NeuAc；也可以直接重组菌种通过发酵获得NeuAc。另外，自然界中的大肠埃希氏菌K1、K92、K235等，能够合成聚唾液酸(poly Sialic acid，PSA)。大肠埃希氏菌K235产生的PSA是NeuAc以糖苷键链接而成的同聚物，通过自然菌种发酵产生PSA，再进一步水解提纯获得唾液酸单体，是发酵法制备唾液酸的有效方法。由于NeuAc是唾液酸家族中最常见的糖类，因此，在未特别说明的情况下，唾液酸特指NeuAc。

天然或诱变来源的大肠埃希氏菌发酵液中的唾液酸以聚唾液酸的形式存在。发酵液中聚唾液酸分离及唾液酸单体的提纯，一般将发酵液中的菌体等不溶性杂质先行分离，得到富含PSA的溶液或PSA纯品，再进一步水解分离提纯获得SA产品。文献^[1]“大肠杆菌发酵液中唾液酸的提取”和文献^[2]“聚唾液酸的水解与唾液酸的纯化”的方法：将发酵液加入一定量氯化钙饱和溶液，离心(去除菌体)，超滤浓缩，95％乙醇沉淀，75％乙醇洗涤，干燥得到PSA粗品。该粗品溶解，水解(将PSA水解成SA单体)，中和，离心，离子交换层析，冷冻干燥获得唾液酸成品。文献^[3]将发酵液经离心去除菌体，再用大量乙醇使聚唾液酸析出，干燥后用水复溶，再用硅藻土助滤获得滤液，用乙醇沉淀PSA，并干燥精制得PSA，PSA溶解后进行水解，脱色，结晶，获得唾液酸产品。专利CN101195661B，CN103361283B，CN104628794B等则将发酵液中的菌体去除后，直接提取精制PSA，最终获得PSA的产品，但不是唾液酸单体。总之，现有技术中制备唾液酸的方法过于复杂，所得唾液酸的纯度较低，产率一般。

参考文献：

1.吴剑荣等,大肠杆菌发酵液中唾液酸的提取.中国医药工业杂志,2003.34(1):p.8-10.

2.赵慧等,聚唾液酸的水解与唾液酸的纯化.无锡轻工大学学报,2004.23(4):p.16-19.

3.郑志永等,唾液酸溶析结晶工艺的研究.食品与发酵工业,2006.32(5):p.58-61.

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种唾液酸的制备方法，该方法更简单，所制备的唾液酸纯度高，产率更高。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种采用聚唾液酸发酵液制备唾液酸的方法，包括如下步骤：