[发明专利]一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法

权利要求书

1.一种玉米自交系京724遗传转化的方法，包括如下步骤：

1)采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至玉米自交系京724幼胚中，得到枪击后幼胚；

2)将所述枪击后幼胚接种至愈伤诱导培养基中进行培养，得到胚性愈伤组织；

3)将所述胚性愈伤组织接种至筛选培养基中进行培养，得到抗性愈伤；

4)将所述抗性愈伤接种至再生培养基中进行培养，得到幼苗；

5)将所述幼苗在生根培养基中培养，得到玉米自交系京724转基因植株；

所述2)中，每升所述愈伤诱导培养基为1000X N6基础盐0.35ml、MS基础盐2.3g、1000XN6有机1.5ml、二水氯化钙0.7g、蔗糖30g、脯氨酸1.4g、水解酪蛋白0.5g、肌醇0.1g、2,4-D2.5mg、麦草畏2mg、6-苄氨基嘌呤0.4mg、植物凝胶3g，PH值为5.8；

所述4)中，所述再生培养基为再生培养基Ⅱ；

每升所述再生培养基Ⅱ为20X N6大量无机盐50ml、1000X MS微量无机盐1ml、1000X N6有机1ml、甘氨酸2mg、蔗糖30g、甘露醇20g、水解酪蛋白0.3g、谷氨酰胺0.4g、6-苄氨基嘌呤3mg、萘乙酸0.2mg、植物凝胶3g，PH值为5.8。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述1)中，所述玉米自交系京724幼胚在轰击前还包括在高渗培养基中进行培养的步骤；

或，所述2)包括如下步骤：将枪击后幼胚先在高渗培养基中培养，然后转移至所述愈伤诱导培养基中培养至幼胚表面有愈伤突起时再转移至筛选培养基中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述3)中，每升所述筛选培养基为将所述愈伤诱导培养基与筛选剂混匀得到的；

所述筛选剂在所述筛选培养基中的浓度为5-10mg/L；

所述筛选剂为潮霉素。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述5)中，每升生根培养基包括MS基础盐2g、1000X MS有机0.5ml、蔗糖15g、萘乙酸0.25mg、植物凝胶3g，PH值为5.8。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述1)中，所述幼胚为从幼穗上剥离获得的幼胚；所述幼穗为待玉米籽粒最大直径为4-4.5mm时采摘的幼穗；

或，所述1)中，所述轰击参数为1150psi氦气压力，27InHg真空度，9cm射击距离；

或，所述2)中，所述培养条件如下：26-28℃暗培养9-12天；

或，所述3)中，所述培养条件如下：26-28℃暗培养14-20天；

或，所述4)中，所述培养条件如下：25-26℃，光照周期为白光16h/黑暗8h条件下培养25-30天；

或，所述5)中，所述培养条件如下：25-26℃，光照周期为白光16h/黑暗8h条件下培养10-15天。

6.一种玉米自交系京724的组织培养方法，包括如下步骤：

m1)将玉米自交系京724幼胚在权利要求1中所述的愈伤诱导培养基中进行培养，得到胚性愈伤组织；

m2)将所述胚性愈伤组织接种至权利要求1中所述的再生培养基中进行培养，得到幼苗；

m3)将所述幼苗转移至权利要求4中所述的生根培养基中进行培养，得到玉米自交系京724植株。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述m1)包括如下步骤：将玉米自交系京724幼胚在权利要求1中所述的愈伤诱导培养基中进行第一次培养，待幼胚表面有愈伤突起时转移至新的所述愈伤诱导培养基中进行第二次培养，得到结构疏松、有光泽感、淡黄色胚性愈伤组织；

或，所述第一次培养条件如下：26-28℃暗培养10-14天；

或，所述第二次培养条件如下：26-28℃暗培养14-20天；

或，所述m2)中，所述培养条件如下：25-26℃，光照周期为白光16h/黑暗8h条件下培养25-30天；

或，所述m3)中，所述培养条件如下：25-26℃，光照周期为白光16h/黑暗8h条件下培养10-15天。