[发明专利]一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法

说明书

本发明公开了一种基因枪介导的玉米骨干自交系的遗传转化方法。所述方法包括如下步骤：1)采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至玉米自交系京724幼胚中，得到枪击后幼胚；2)将所述枪击后幼胚接种至愈伤诱导培养基中进行培养，得到胚性愈伤组织；3)将所述胚性愈伤组织接种至筛选培养基中进行培养，得到抗性愈伤；4)将所述抗性愈伤接种至再生培养基中进行培养，得到幼苗；5)将所述幼苗在生根培养基中培养，得到玉米自交系京724转基因植株。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种玉米骨干自交系的遗传转化方法，特别涉及一种基因枪介导的玉米骨干自交系京724的遗传转化方法。

背景技术

玉米是粮食、饲料、工业原材料供给的重要作物，在人口增长、畜牧业、工业高速的发展的现代具有重要地位。据农业部统计，2017/2018年度我国玉米供需缺口430万吨，根据玉米行业发展趋势报告分析，在2016-2030年期间中国玉米产量的增长速度会有所下降，而玉米总消费量的增长速度将会明显超出产量的增长速度，国内供需缺口将会进一步扩大。若在不扩大种植面积的情况下，应对玉米的需求趋势而言，玉米生产方式方法则需不断优化升级。随分子育种技术的发展，借助分子辅助育种、转基因技术、基因编辑技术等现代育种技术与传统育种技术的综合应用，可对抗除草剂、抗虫、抗病、品质、产量等农艺性状的改良提供有力的助推。

自上世纪90年代以来，针对玉米的遗传转化研究快速发展，虽转化受体材料从原生质体、悬浮细胞系、花药、幼穗、幼胚、组织生长点到成熟胚均有涉猎，转化方式亦从PEG转化、基因枪介导、农杆菌介导、花粉管导入到纳米介导各有千秋，但借助上述路径并能稳定获得转化阳性植株，且具优良农艺性状及应用价值的玉米自交系仍待拓展。

玉米骨干自交系京724作为京科968的亲本之一，具有籽粒产量高、抗病性好、配合力高的优良特性。但对于玉米骨干自交系京724而言，目前还没有关于其高效组培及遗传转化方法的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种基因枪介导的玉米骨干自交系京724的高效遗传转化方法。

本发明提供的基因枪介导的玉米骨干自交系京724的高效遗传转化方法包括如下步骤：

1)采用基因枪法将含有目的基因的载体轰击至玉米自交系京724幼胚中，得到枪击后幼胚；

2)将所述枪击后幼胚接种至愈伤诱导培养基中进行培养，得到胚性愈伤组织；

3)将所述胚性愈伤组织接种至筛选培养基中进行培养，得到抗性愈伤；

4)将所述抗性愈伤接种至再生培养基中进行培养，得到幼苗；

5)将所述幼苗在生根培养基中培养，得到玉米自交系京724转基因植株。

上述方法中，所述1)中，所述玉米自交系京724幼胚在轰击前还包括在高渗培养基中进行培养的步骤。所述培养时间具体可为4-6h。

进一步的，所述幼胚为从幼穗上剥离获得的幼胚；所述幼穗为待玉米籽粒最大直径为4-4.5mm时采摘的幼穗。

更进一步的，所述轰击参数具体可为1150psi氦气压力，27InHg真空度，9cm射击距离。

所述含有目的基因的表达载体具体可为pY105重组载体。

上述方法中，所述2)包括如下步骤：将枪击后幼胚先在高渗培养基中培养(培养时间具体可为4-6h或4h或5h或6h)，然后转移至所述愈伤诱导培养基中培养至幼胚表面有愈伤突起时再转移至筛选培养基中。