[发明专利]快速鉴别小麦AL型不育系的方法及所用的引物

权利要求书

1.引物在快速鉴别小麦AL型不育系和保持系中的应用，其特征在于：所述的引物为：

F2：5’-TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATT-3’；

R1：5’-GTGTATGTAGATCTAATTCT-3’；

根据所述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记用于小麦AL型不育系和保持系的分析鉴别；所述的分析鉴别：

选用限制性内切酶XmnI，XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，

利用所述的引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物回收后用XmnI进行酶切，根据酶切产物的结果，判断鉴定目标：保持系的产物能被切开，不育系的产物不能被切开。

2.一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法，其特征在于：根据权利要求1所述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记用于小麦AL型不育系和保持系的分析鉴别；所述的分析鉴别：

选用限制性内切酶XmnI，XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，

利用所述的引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物回收后用XmnI进行酶切，根据酶切产物的结果，判断鉴定目标：保持系的产物能被切开，不育系的产物不能被切开。

3.根据权利要求2所述的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法，其特征在于：所述的扩增通过PCR反应体系实现：

PCR反应体系如下：

DNA 1-3μL，

Tach1-F2 1-2μL，

Tach1-R1 1-2μL，

2X Taq mix 15-25μL，

H₂O 10-20μL，

Total volume 35-45μL，

反应条件：

94-96℃ 2-4min，

40-50℃ 25-35s，

70-74℃ 25-35s，

30-40 cycles，

70-74℃ 4-6min，

dCAPS酶切体系：

PCR product 6-8μL，

Buffer 2-4μL，

XmnI 0.5-1.5μL，

H₂O 18-20μL，

37±0.5℃ 50-70min。

4.根据权利要求3所述的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法，其特征在于：所述的PCR反应体系如下：

DNA 2μL，

Tach1-F2 1.5μL，

Tach1-R1 1.5μL，

2X Taq mix 20μL，

H₂O 15μL，

Total volume 40μL，

反应条件：

95℃ 3min，

94℃ 30s，

45℃ 30s，

72℃ 30s，

35 cycles，

72℃ 5min，

dCAPS酶切体系：

PCR product 7μL，

Buffer 3μL，

XmnI 1μL，

H₂O 19μL，

37℃ 1h。