[发明专利]快速鉴别小麦AL型不育系的方法及所用的引物

说明书

本发明涉及一种快速分子鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物，通过开发一种dCAPS分子标记，通过该分子标记对小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别。与现有技术相比，本发明可以在苗期就对育苗进行高效准确快捷的鉴定，及时采取不正当的手段相应的措施，可以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。

技术领域

本发明涉及一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物。

背景技术

小麦AL型不育系和保持系在生长过程中的形态非常相近。

传统的区别方法是在小麦抽穗期通过观察进行鉴别，一是看农艺性状是否相近。如果相近，在抽穗期再观察散粉情况，不育系正常情况不散粉，保持系散粉。

其缺点缺陷是：用肉眼观察的准确性较低，特别是到了抽穗期之后，育种试验的大部分工作已经完成，如果出现杂株较多的情况，试验就会报废，而即便出现的杂株在可以忍受的范围内，也会在一定程度上造成工作的浪费。

因此，一种利用分子标记技术快速、准确鉴别小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系鉴别开来的方法就应运而生。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法及所用的引物，通过开发一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。

为实现上述目的，本发明提供以下的技术方案：

本发明的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的引物为序列表中的DNA序列2103和序列2102。

根据上述的引物，建立一种dCAPS分子标记，通过该分子标记可以用于小麦AL型不育系和保持系，即A系和B系的快速和早期的分析鉴别，以进一步对后期的培育试验工作进行优化，提高试验的可靠性，并且降低或减少无用工作。

本发明的快速鉴别小麦AL型不育系和保持系的方法如下：

根据差异SNP位点的基因序列，在保守区域设计引物：

TaChl-F1：TTTGCGAATTCCTACTTTGT；

TaChl-R1：GTGTATGTAGATCTAATTCT。

通过TaChl-F1/R1引物对，对提取的6个gDNA进行扩增，扩增产物用F1引物进行测序。

测序比对结果显示，在156碱基处A系品种碱基为A，B系品种碱基为C。

根据上面的测序结果，进行序列分析，选用限制性内切酶XmnI，并设计突变引物：

TaChl-F2(XmnI)：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATT。

XmnI的切割序列为GAANNNNTTC，

利用F2/R1引物对扩增出的序列为

A系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTA

或

B系：TTTTTATTTTATAGTATTACTTCGAATTAATTC。

只有引物下游序列的第一个碱基为C的PCR产物才能被XmnI切开。

利用引物F2/R1对鉴定目标gDNA进行扩增，扩增产物(如图3)回收后均用XmnI进行酶切，酶切产物用2.0％的高分辨率的琼脂糖凝胶进行电泳，结果(如图4)显示B系的所有产物均被切开，而A系的所有产物没有被切开。