[发明专利]微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法及所用引物

权利要求书

1.微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒所用引物组合，其特征是：包括引物F3-3、B3-3、FIP-3、BIP-3；

引物F3-3：GGAAGGGCCATTATAAATTTCC，

引物B3-3：GGATGTGCCATTTTCAATGC；

引物FIP-3：CTTGAGTCGACCGGGTGTTTAGCACTTGTCGACATATGAAC；

引物BIP-3：AGTTCCAAGCATGGTATGAAGGAGCCATTAGTCCATTCAATAAGATCC。

2.根据权利要求1所述的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒所用引物组合，其特征是还包括环引物LB3-1；

环引物LB3-1：TTAAAGGGGATTATGGTGTTGACG。

3.利用如权利要求1或2所述的引物组合进行的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法，其特征是包括如下步骤：

1)、包埋扩增引物：

引物F3-3(100μmol·L^-1)和引物B3-3(100μmol·L^-1)各1μL，FIP-3(100μmol·L^-1)和引物BIP-3(100μmol·L^-1)各8μL，环引物LB3-1(100μmol·L^-1)4μL，0.5％海藻糖26μL，ddH₂O补足总体积至150μL形成引物混合液，每个微流控芯片检测孔加入1.5μL所述引物混合液，置于恒温加热台65℃、10min；

2)、加样：

50μL的样品混合液由荧光等温扩增预混液18μL、待测样品cDNA5μL、ddH₂O补足总体积至50μL组成；

吸取50μL的样品混合液加入至一个微流控芯片加样孔，设置ddH₂O作为阴性对照；

3)、恒温扩增：

将微流控芯片进行恒温扩增，然后根据Ct值进行判断。

4.根据权利要求3所述的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法，其特征是所述步骤3)为：

将微流控芯片置于SC-MA2000微流控芯片检测仪中进行恒温扩增，温度为63.5℃，反应时间为60min；

当Ct30，且有明显扩增曲线时，同时阴性对照未检出，判定待测样品中含有甘薯羽状斑驳病毒；

当Ct≥30或显示未检出时，判定待测样品中不含有甘薯羽状斑驳病毒。

5.根据权利要求3或4所述的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法，其特征是：每个微流控芯片加样孔对应4个微流控芯片检测孔。