[发明专利]微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法及所用引物

说明书

本发明公开了一种微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒所用引物组合，包括引物F3‑3、B3‑3、FIP‑3、BIP‑3，还包括环引物LB3‑1。本发明还同时公开了利用上述引物组合进行的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法，包括如下步骤：利用上述引物制备成引物混合液，加入芯片检测孔内；利用待测样品制备成样品混合液加入至芯片加样孔，将微流控芯片进行恒温扩增，然后根据Ct值进行判断。本发明根据实时荧光信号的出现时间、强度和位置，可在30分钟内快速、高效检测SPFMV，为甘薯病毒病害的监测防控提供技术支持。

技术领域

本发明涉及一种微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法。

背景技术

甘薯(Ipomoea batatas.Lam)，又名红薯、地瓜等，为旋花科甘薯属植物。甘薯种植广泛，是重要的粮食安全和新型能源用作物，也是轻工业、饲料的重要原料。甘薯富含可溶性糖、维生素C和食用纤维等各种营养物质，据《本草纲目》记载，有生津止渴，补脾益气，宽肠通便等功效。因此，被世界卫生组织列为13种最佳蔬菜之首。目前我国甘薯的年产量达一亿吨，种植面积338万公顷，而且种植面积还在不断增加。

由于甘薯采用扦插、分株等方式进行无性繁殖，一旦感染到病毒，将会代代相传，逐年累积，造成病毒病害逐年加重。据安徽、山东、北京、江苏等省市的调查研究发现，病毒病导致的甘薯产量损失严重时高达50％以上，经济损失约达40亿元。到目前为止，全世界已报道的甘薯病毒有30多种。甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus，SPFMV)已被发现广泛存在于世界各地的甘薯中，是甘薯上最常见的病毒。传统的生物学鉴定只能为植物病毒病提供一些初步的信息和诊断。分子生物学检测技术以其灵敏高效的特点已成为实验室常用的方法，但检测时间较长。血清学检测技术应用最为广泛，但检测结果可能会存在假阳性，同时对于复合侵染的病毒病，ELISA检测方法灵敏度会受到一定影响。电子显微镜可以观察植物病毒内部的细胞学变化，但需要与血清学或者分子生物学检测技术结合才能更好地对病毒进行准确的鉴定，同时植物病毒电镜检测直观简便，但仪器昂贵，对操作人员技术要求较高。现有的检测植物病毒的传统方法一般是RT-PCR，该方法的缺点是耗时时间长，一般需要2小时左右。

微流控芯片技术是近年来迅速发展的新的植物病毒检测技术，可以在30分钟内快速准确的检测植物病毒，具有较高的特异性和灵敏度，仅需SC-MA2000微流控芯片检测仪和恒温加热台设备即可完成检测，不需要其他昂贵的设备。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒的方法，本发明根据实时荧光信号的出现时间、强度和位置，可在30分钟内快速、高效检测SPFMV，为甘薯病毒病害的监测防控提供技术支持。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒所用引物组合(SPFMV-3)：包括引物F3-3、B3-3、FIP-3、BIP-3；

引物F3-3：GGAAGGGCCATTATAAATTTCC，

引物B3-3：GGATGTGCCATTTTCAATGC；

引物FIP-3：CTTGAGTCGACCGGGTGTTTAGCACTTGTCGACATATGAAC；

引物BIP-3：AGTTCCAAGCATGGTATGAAGGAGCCATTAGTCCATTCAATAAGATCC。

作为本发明的微流控芯片快速检测甘薯羽状斑驳病毒所用引物组合的改进，还包括环引物LB3-1；

环引物LB3-1：TTAAAGGGGATTATGGTGTTGACG。