[发明专利]基因重组抗2019-nCoV和其它冠状病毒IgY及其小分子抗体以及应用

权利要求书

1.一种抗冠状病毒的抗体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、制备抗原：将目标冠状病毒的灭活的冠状病毒或冠状病毒蛋白成分加入佐剂，制得病毒抗原或蛋白抗原；

S2、制备免疫蛋：将所述病毒抗原或蛋白抗原免疫产蛋禽类，得到抗冠状病毒的免疫蛋；

S3、分离抗体：从所述免疫蛋中分离抗所述目标冠状病毒的IgY抗体。

2.根据权利要求1所述的抗体制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述抗原成分为如下中的至少一种：灭活的冠状病毒液、冠状病毒重组S蛋白、冠状病毒重组S1蛋白、冠状病毒重组S2蛋白、冠状病毒的受体结合域重组蛋白、冠状病毒重组N蛋白、冠状病毒重组S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述灭活的冠状病毒液使用如下方法制备：

(1)使用目标冠状病毒感染体外培养用的细胞株；

(2)选择病毒感染量和培养条件培养目标冠状病毒，将收获的病毒反复冻融裂解备用；

(3)灭活病毒：在不断搅拌病毒液的条件下,缓慢加入灭活剂来灭活病毒。

4.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述冠状病毒S蛋白为基因重组表达的冠状病毒S蛋白全序列多肽，偶联KLH和BSA获得的重组多肽蛋白。

5.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述冠状病毒重组S1蛋白、冠状病毒重组S2蛋白使用如下方法制备：

(1)分别表达冠状病毒S1蛋白免疫优势决定区多肽和冠状病毒S2蛋白免疫优势决定区多肽；

(2)分别与KLH和BSA偶联成多肽，获得冠状病毒重组S1蛋白重组冠状病毒重组S1蛋白。

6.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述冠状病毒的受体结合域重组蛋白使用如下方法制备：

(1)构建PET32(a)-RBD重组质粒；

(2)用原核或真核表达系统进行表达；

(3)运用Fmoc固相法或其它方法合成肽链；

(4)与KLH和BSA偶联成多肽。

7.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述冠状病毒N蛋白为基因重组表达的冠状病毒N蛋白全序列多肽，偶联KLH和BSA获得的重组N蛋白。

8.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于，所述冠状病毒S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白使用如下方法制备：

(1)化学合成S蛋白片段和N蛋白片段的基因序列；

(2)将两个基因片段串联,克隆至质粒的表达位点；

(3)将重组质粒转化原核或真核表达系统，筛选获得高效表达的工程菌，表达和纯化冠状病毒S蛋白片段和N蛋白片段融合蛋白。

(4)与KLH和BSA偶联，获得冠状病毒S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白抗原成份。

9.根据权利要求1所述的抗体制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述佐剂为福氏佐剂或其它佐剂，所述灭活的冠状病毒液或重组蛋白成分与所述福氏佐剂经过高速匀浆后形成所述抗原，所述抗原为油包水乳液。

10.根据权利要求1所述的抗体制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，每隔两周免疫注射一次产蛋禽类，共注射2-5次，最后一次注射后的至少第12天后检取产蛋禽类所产免疫蛋。

11.根据权利要求1所述的抗体制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，采用纯水提取法、氯仿萃取法、冷乙醇沉淀法或硫酸铵沉淀法分离抗所述目标冠状病毒的IgY粗提物。