[发明专利]一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：包括胶体金双结合物垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，所述双标记抗体结合物垫为胶体金和生物素标记。

2.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：

将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为15～20μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物；

取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。

3.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：

将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度10～15μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1-2μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000 rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；

取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。

4.如权利要求1-3任一项权利要求所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：还包括样品垫，所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。

5.如权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液；所述大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种，添加量为0.05%～1%；所述表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100、S9中的至少两种，添加量为0.05%~0.5%；所述封闭剂为酪蛋白、BSA中的一种，添加量为0.05%～5%。

6.如权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，所述底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫。

7.如权利要求5所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。

8.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-7任一项权利要求所述的试纸条和样本稀释液。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液包括pH为8.0～8.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～0.5％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.04％的吐温20和体积分数为0.05～0.15％的Proclin-300。

10.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

(1)检测：

a、检测样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、痰液；

b、在附属的试剂管中加入0.5mL样本稀释液；

c、将采集样本后的棉棒浸在试剂管中的稀释液中搅拌，从试剂管的外侧，用手指挤压棉棒数次，使提取液充分浸透棉棒，然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测；

d、滴加3滴（约100µL）步骤c制得的样品液到检测卡的加样孔，样品液通过加样孔到达试纸条，15分钟观察结果，20分钟后结果无效；

(2)结果判断：

a、阴性：仅质控区出现一条红色条带，在测试区内无红色条带出现；

b、阳性：两条条带出现，一条红色条带位于测试区内，另一条红色条带位于质控区；

c、无效：质控区未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。