[发明专利]一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，包括金标垫层和硝酸纤维素膜，其特征在于：所述金标垫层固相化有2019-nCoV抗原-胶体金复合物或2019-nCoV抗原-抗体-胶体金复合物，所述硝酸纤维素膜包被有鼠抗人IgM抗体的检测线和鼠抗人IgG抗体的检测线。

2.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述金标垫层胶体金颗粒标记2019-nCoV重组抗原或者胶体金颗粒标记2019-nCoV单克隆抗体，再偶联1：5~1：1（抗原：抗体）的2019-nCoV天然抗原。

3.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述金标垫层2019-nCoV抗原-抗体-胶体金复合物的制备包括以下步骤：

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中按15~20μg/mL比例缓慢加入2019-nCoV单克隆抗体，充分反应后，以8000~10000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，然后加入1：5~1：1（抗原：抗体）的2019-nCoV天然抗原，静置反应10~20min，制得2019-nCoV抗原-抗体-胶体金复合物。

4.如权利要求1-3任一项权利要求所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述金标垫层还固相化有羊IgG抗体-胶体金复合物或兔IgG抗体-胶体金复合物或鸡IgY抗体-胶体金复合物，所述硝酸纤维素膜还包被有兔抗羊IgG抗体或羊抗兔IgG抗体或山羊抗鸡IgY抗体的质控线。

5.如权利要求4所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述鸡IgY抗体-胶体金复合物的制备包括以下步骤：

在金溶胶中按10~15μg/mL比例缓慢加入鸡IgY抗体，充分反应后，以8000~10000rpm离心30分钟，弃上清，10倍浓缩，制得鸡IgY抗体-胶体金复合物；

2019-nCoV抗原-抗体-胶体金复合物按10~15%浓度，鸡IgY抗体-胶体金复合物按3~5%浓度，涂布于玻璃纤维素膜上，干燥。

6.如权利要求4所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜包被步骤如下：

鼠抗人IgM 抗体、鼠抗人IgG抗体以1.2~1.5mg/mL浓度，山羊抗鸡IgY抗体以1.5~2.0mg/mL浓度喷于硝酸纤维素膜上包被并干燥。

7.如权利要求1-3任一项权利要求所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：还包括样品垫层和吸水层，所述吸水层位于硝酸纤维素膜的上方；所述金标垫层及样品垫层位于硝酸纤维素膜的下方，样品垫层一端压住金标垫层一端0.5~1mm，金标垫层另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5~1mm，吸水层的一端压住硝酸纤维素膜另一端0.5~1mm。

8.如权利要求7所述的一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试纸条，其特征在于：所述样品垫层的制备方法如下：

样品垫处理液为50mM Tris-HCL缓冲液，pH9.0，含0.5%大分子聚合物PVP、0.05~0.2%吐温20、0.01~0.05%曲拉通X-100、0.5%封闭剂酪蛋白、0.1~0.2%抗RBC单抗，涂布于玻璃纤维素膜上，干燥。

9.一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-8任一项权利要求所述的试纸条和样本稀释液，所述样本稀释液由牛血清白蛋白BSA、曲拉通X-100以及防腐剂配制而成。

10. 一种新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM、IgG抗体检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

（1）检测

a、检测样本为血清、血浆、全血；

b、取血清、血浆10µL，全血20µL到检测卡的加样孔，滴加2滴样本稀释液，15分钟观察结果，20分钟后结果无效；

（2）结果判断

a、阴性：

仅质控线C处出现一条红色条带，在检测线T1、检测线T2处无红色条带出现，阴性结果表明：样本中不含待测抗体；

b、阳性：

（1）、三条红色条带出现，两条红色条带分别出现于检测线T1、检测线T2处，另一条红色条带出现于质控线C处，阳性结果表明：样本中同时含有2019-nCoV IgG、IgM抗体；

（2）、两条红色条带出现，一条红色条带分别出现于检测线T1处，另一条红色条带出现于质控线C处，阳性结果表明：样本中含有2019-nCoV IgG抗体；

（3）、两条红色条带出现，一条红色条带分别出现于检测线T2处，另一条红色条带出现于质控线C处，阳性结果表明：样本中含有2019-nCoV IgM抗体；

c、无效：质控线C处未出现红色条带，表明操作失误或试剂失效。