[发明专利]一种用于检测非洲猪瘟病毒DNA的组合物及试剂盒

说明书

本申请公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒DNA的组合物，可以包括一组或者多组引物对和探针具体如下所示：其中一组由引物对引物‑F：SEQ ID NO：1，引物‑R：SEQ ID NO：2和探针：SEQ ID NO：9组成；本发明还提供一种试剂盒，包括上述组合物和用于PCR的体系，本发明能够针对非洲猪瘟检测体现极高的特异性和灵敏度，对于精准检测非洲猪瘟病毒的存在具有效率高，准确性高，抗干扰能力强，对实现实时疫情检测和控制具有突出作用。

技术领域

本生物制剂或组合物、试剂盒领域，尤其涉及采用TaqMan法进行基因检测所需的组合物和试剂盒，具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒DNA的组合物及试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African Swine fever，East African Swine fever,ASF)，是一种急性，发热传染性很高的滤过性病毒所引起的猪病，其特征是发病过程短，但死亡率高达100％，病猪临床表现为发热，皮肤发绀，淋巴结，肾，胃肠粘膜明显出血。本病自1909年在肯尼亚首次报道，一直存在于撒哈拉以南的非洲国家，1957年先后流传至西欧和拉美国家，多数被及时扑灭，但在葡萄牙，西班牙西南部和意大利的撒丁岛仍有流行。2007年以来，非洲猪瘟在全球多个国家发生、扩散、流行，特别是俄罗斯及其周边地区。

2018年8月，中国在辽宁沈阳、河南郑州、江苏连云港3个相隔很远的地区，接连发现多起非洲猪瘟疫情。11月23日，北京市房山区排查出非洲猪瘟疫情。2019年中国内陆地区，包括以重庆、四川为主的西南地区均大面积发现诸多病症，虽经疫情控制部门及时的进行消杀掩埋，但依然造成数量巨大的患病群体，并快速蔓延。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：通过采用本申请提供的试剂盒能够精准的判别被检测样品是否含有非洲猪瘟病毒，以为后续的疫情处置提供准确的、科学的判定依据，避免检测手段的误差导致可疑携带体被掩埋导致财产损失；亦可避免带病体出现漏检的可能。本申请人的研发团队经过反复研究和实验，旨在解决现有技术中的不足，避免出现阳性、弱阳、阴性的检测结果，由于非洲猪瘟的疫情传播迅速，需要及时的进行判断和隔离，现有技术中出现的弱阳状态则需要二次复检，以进一步确定携带体是否已经染病，那么在初检定论至复检结果过程中需要一定的处理时间周期，那么在该周期期间，可能发生疫情的进一步传播，不能实现即时的隔离问题。本申请人研发团队经过反复提取实验，通过分析非洲猪瘟的全基因组序列研发出一种精准检测的引物对和探针，通过本发明提供的组合物及试剂盒采用现有PCR扩增方式进行精准判断，以此完成本发明，并达到预期技术效果。

为了达到上述目的，本申请所采用的技术方案为：

一种用于检测非洲猪瘟病毒DNA的组合物，可以包括以下四组引物对和探针中的A组或B组或者C组或者D组，也可以包括A组在内的多组组合，也可以包括ABCD组。所述ABCD四组对应的引物对和探针具体如下所示：

所述A组由引物对引物-F：SEQ ID NO：1，引物-R：SEQ ID NO：2和探针：SEQ ID NO：9组成；

另一组B由引物对引物-F：SEQ ID NO：3，引物-R：SEQ ID NO：4和探针：SEQ ID NO：10组成；还包括

另一组C由引物对引物-F：SEQ ID NO：5，引物-R：SEQ ID NO：6和探针：SEQ ID NO：11组成；还包括

另一组D由引物对引物-F：SEQ ID NO：7，引物-R：SEQ ID NO：8和探针：SEQ ID NO：12组成。

所述探针A、探针B和探针C均包含荧光分子5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团，所述5’端采用FAM、HEX、CY3、CY5、VIC、ROX、JOE中任一一种，所述3’端对应的采用BHQ1、BHQ2、Dabcyl、TAMRA、eclipse中任一一种。