[发明专利]一种小鼠强直性脊柱炎模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种小鼠强直性脊柱炎模型的构建方法，旨在提供一种能在SPF级环境下成批量造模，且与临床症状一致、方法简单、成模率高、价格便宜的小鼠强直性脊柱炎模型的构建方法；其技术方案依次包括下述步骤：1)SPF级3～4周龄HLA‑B27转基因小鼠雌雄各半，12h明暗交替，适应性饲养5天；2)将自发AS食蟹猴粪便代谢物经滤过滤除菌后，灌肠步骤1)中的SPF级HLA‑B27小鼠，在SPF级环境下饲养，灌肠后的第11周检查，评价；属于生物技术领域。

技术领域

本发明涉及一种动物模型的构建方法，具体涉及一种小鼠强直性脊柱炎模型的构建方法，属于生物技术领域。

背景技术

强直性脊柱炎(AS，ankylosing spondylitis)是以脊柱为主要病变部位的慢性病，累及骶髂关节，是一种自身免疫性疾病。AS多发于青少年男性，具有一定的家族聚集性。随着时间的推移，AS患者会出现脊柱及外周关节强直，最终导致脊柱僵直变形，致畸致残，对患者生存质量造成严重影响。目前对于AS仍没有较好的治疗方案，常以消炎止痛为主，常用药包括非甾体抗炎药、传统抗风湿药、生物制剂等，但这些药物无法逆转AS导致的韧带钙化及骨性强直，且长期使用会引起严重的不良反应。

强直性脊柱炎疾病动物模型现状：AS疾病动物模型是研究AS发病机制和药物开发的重要载体。随着AS研究的深入，目前已经构建了多种动物模型，这些疾病动物模型的构建对AS的研究起到了重要作用，但仍有一定得缺陷。

现有AS疾病动物模型包括以下几种：

(1)HLA-B27/人β2m双转基因大、小鼠模型。优点：该模型发病动物表现出明显的外周关节炎症、骨赘及关节强直。缺点：①并未表现出稳定的脊柱关节受累；②该模型在SPF级环境下不发病，转移至普通环境下才开始发病，发病率不足50％。③该模型造模周期长、技术要求高、步骤复杂、价格昂贵，最为关键的是随着动物年龄的增长，症状反而变轻。

(2)炎症相关动物模型，如蛋白聚糖诱导的脊柱炎(proteoglycan-inducedspondylitis,PGIL)小鼠模型和内质网氨基肽酶1敲除(endoplasmic reticulumaminopeptidase,ERAP1-/-)小鼠模型等。优点：①PGIL小鼠模型早期出现外周关节炎，后期出现外周及脊柱关节的畸形、强直和功能受限，病理上表现为早期的滑膜炎、软骨侵蚀和后期的关节软骨细胞增殖导致的关节融合。②ERAP1-/-小鼠模型不但出现自发性中轴关节强直、脊柱炎症和全身性骨质疏松。③此类模型操作简便，周期短，症状明显。缺点：AS是与人类白细胞抗原B27密切相关的疾病，炎症诱导的动物模型表现出更少的基因限制性，与临床AS有别，且成模率不稳定。

(3)自发性动物模型。①DBA/1小鼠是国际公认的筛选和研究治疗关节炎的动物模型。优点是：造模方法简便；缺点是周期长，且只有雄性动物发病。②进行性强直(ank/ank)小鼠模型，在临床表现、放射学和病理学上与人类AS相似，可出现中轴关节和外周关节的强直，关节周围软组织纤维化、骨化和关节强直；②缺点：ank/ank基因纯合子鼠因常染色体隐形异常，致鼠自发性进行性强直，导致疾病得素不明。尽管模型鼠的X射线改变与AS非常相似，但是这种强直是非炎症性的，与人临床AS有异。

AS与人白细胞表面抗原B27(HLA-B27)强相关，HLA-B27是AS最主要的遗传危险因素，约90％的患者HLA-B27阳性。早在19世纪80年代，就有学者对HLA-B27转基因小鼠AS模型进行了探索，但HLA-B27转基因小鼠并不发生炎性病变。HLA-B27小鼠只有与β2-微球蛋白整合后才能表现出AS症状，此外该模型只有在普通级环境下才发病，研究发现肠道菌群及其代谢物在其中起了至关重要的作用。临床研究也发现AS患者多数有肠道感染病史，60％～70％的AS患者出现肠炎。