[发明专利]一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于，包括上游引物容器、下游引物容器、探针容器、内参容器、数字PCR反应缓冲液容器、阳性对照容器和阴性对照容器；

所述上游引物容器内具有上游引物，所述上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

所述下游引物容器内具有下游引物，所述下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

所述探针容器内具有探针，所述探针具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于，所述探针的5’端标记有FAM基团，所述探针的3’端标记有BHQ基团。

3.根据权利要1所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于，所述内参容器中包含内参上游引物，内参下游引物和内参探针；

所述内参上游引物具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

所述内参下游引物具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

所述内参探针具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

4.根据权利要1所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于,所述内参探针5’端标记有VIC基团，所述探针的3’端标记有MGB基团。

5.根据权利1所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于, 所述数字PCR反应缓冲液容器中放置有PCR反应液：包含DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液、dNTP、逆转录酶、DTT。

6.根据权利1所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照容器中包含有带有DEK／CAN融合基因的质粒和带有ABL基因的质粒。

7.根据权利6所述的一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照容器中仅含有带有ABL基因的质粒。

8.如权利要求1-7任一项所述的高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒在DEK／CAN融合基因检测中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

I．提取人血浆样本中的DNA，为待测样品；

II. 采用试剂盒中的引物与探针，配置PCR预备液，再分别加入等体积的待测样品，阳性对照和阴性对照，通过微滴发生器生成微滴后用于PCR反应；

III. 反应完成后采集荧光信号，利用软件对PCR阳性和PCR阴性液滴进行计数，并进行数据分析。

9.如权利要求8所述的高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒在DEK／CAN融合基因检测中的应用，其特征在于，所述PCR反应的条件为：95℃下保持10分钟；94 ℃反应30 s，60℃ 反应1 min，循环40次；98℃下10分钟，并冷却至4℃，升降温速度为2 ℃/s。

10.如权利要求8所述的高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒在DEK／CAN融合基因检测中的应用，其特征在于，所述检测实验结果成立的条件为：阳性对照中ABL质粒大于400拷贝/μl，DEK／CAN融合基因质粒大于200拷贝/μl；阴性对照中ABL质粒大于100拷贝/μl，DEK／CAN融合基因小于1拷贝/μl；所述待测样品中DEK／CAN与ABL基因的扩增比值＝融合基因浓度/ABL浓度。