[发明专利]一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种高灵敏度的DEK／CAN融合基因检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括包括上游引物容器、下游引物容器、探针容器、内参容器、数字PCR反应缓冲液容器、阳性对照容器和阴性对照容器；本试剂盒利用数字PCR对样品中目标核酸的含量进行绝对定量的方法，精确的测定DEK／CAN融合基因，简便、准确、成本低廉，能够满足临床上的诊疗的需求。

技术领域

本发明属于基因检测试剂盒领域，具体涉及一种高灵敏度的DEK /CAN融合基因检测试剂盒。

技术背景

急性髓细胞性白血病是一种髓系造血系统恶性疾病，其发病与融合基因形成有关。DEK/CAN融合基因是由于6号染色体上的DEK基因与9号染色体上的CAN基因结合形成的。DEK/CAN融合基因在急性髓细胞性白血病中比较少见，但是该类型急性髓细胞性白血病治疗反应差，生存期短，预后差。DEK/CAN融合基因的鉴定是正确选择治疗方法的关键。对DEK/CAN融合基因的检测对于病情诊断、疗效评价、预后及病变复发的监测有着重要的意义。目前常用的检测方法主要是荧光定量PCR检测，但现有商品化荧光定量PCR检测方法的灵敏度不够高。而且荧光定量PCR法一般需要参考物或标准品，且易受PCR抑制剂影响，无法绝对定量准确拷贝数，重现性也无法满足对预后监测的需要。

发明内容

针对上述情况，本发明公开了一种高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，能够快速准确、灵敏度较高的进行DEK/CAN融合基因鉴定。

本发明所述的一种高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，包括上游引物容器、下游引物容器、探针容器、内参容器、数字PCR 反应缓冲液容器、阳性对照容器和阴性对照容器；

所述上游引物容器内具有上游引物，所述上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

所述下游引物容器内具有下游引物，所述下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

所述探针容器内具有探针，所述探针具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述探针的5’端标记有FAM基团，所述探针的3’端标记有BHQ基团。当待测样品中不存在目标DNA分子时FAM的荧光被BHQ淬灭，不发出荧光；当待测样品中存在目标DNA分子时，探针与目标DNA分子结合，随后靠Taq酶的5'→3‘双链外切酶活性降解探针而释放荧光基团 FAM，发出荧光。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述内参容器中包含内参上游引物，内参下游引物和内参探针；所述内参上游引物具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；所述内参下游引物具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；所述内参探针具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述内参探针5’端标记有VIC基团，所述探针的3’端标记有MGB基团。 VIC基团为报告基团，MGB为淬灭基团，VIC基团与FAM基团的荧光波长不同，可以被区分。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述数字PCR反应缓冲液容器中放置有PCR反应液：包含DNA聚合酶、Mg²⁺、 PCR反应缓冲液、dNTP、逆转录酶、DTT。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述阳性对照容器中包含有带有DEK/CAN融合基因的质粒和带有ABL基因的质粒。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，所述阴性对照容器中包含有仅有带有ABL基因的质粒。

进一步的，上述高灵敏度的DEK/CAN融合基因检测试剂盒，在DEK /CAN融合基因检测中的应用，包括以下步骤：