[发明专利]AR-V7荧光qRT-PCR法快速定量检测用引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测AR-V7及AR的引物及探针，其特征在于，所述引物及所述探针分别为：

AR-V7 正向引物：CAGGGATGACTCTGGGAGAAA

AR-V7 反向引物：AGTCAGCCTTTCTTCAGGGTC

AR 正向引物：TGCTCAAGACGCTTCTACCAG

AR 反向引物：AGTGAACTGATGCAGCTCTC

AR-V7探针：AGCAGGGATGACTCT

AR探针：TTCTACCAGCTCACCA。

2.含有权利要求1所述引物及探针的用于检测AR-V7及AR的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：外泌体抽提试剂、外泌体核酸抽提试剂和AR-V7的qRT-PCR法检测试剂。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述外泌体抽提试剂包括：

1）磁珠悬液，包括：0.1～5 mg/mL的CD63或CD81或CD9其中的一种或两种或三种抗体包被的羧基磁珠；

2）洗涤液，包括：含有0.005～0.05 mg/mL的牛血清白蛋白的0.01 M磷酸盐缓冲液；

3）洗脱液，包括：0.01 M的磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述外泌体核酸抽提试剂包括：

1）溶液Ⅰ，包括终浓度为1～5 mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5～10 mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为0.01～1 g/ml的Polidocanol、体积百分比为5～45％的乙醇、终浓度为0.5～5mmol/L的β-巯基乙醇；

2）溶液Ⅱ，包括终浓度为1～50 mg/mL的Proteinase K、终浓度为10～50 mmol/L的Tris-HCl、终浓度为0.01～1 mg/ml的PolyA、终浓度10～20 mmol/L CaCl₂；

3）溶液Ⅲ，包括终浓度1～30 mg/mL的直径为300nm的硅羟基磁珠、体积百分比为10～50%的甘油；

4）洗涤液A，包括：终浓度0.1～5 mol/L异硫氰酸胍、终浓度50～100 mmol/L的Tris-HCl、体积百分比浓度为0.5％～5％的Tween-20、体积百分比浓度30～80％的乙醇；

5）洗涤液B，包括：终浓度0.1～5 mol/L NaCl，1～20 mmol/L的Tris-HCl；

6）洗涤液C，包括：终浓度为5～20 mmol/L的Tris-HCl、体积百分比浓度70～80％的乙醇；

7）洗脱液，包括：pH =8.5，终浓度为5～20 mmol/L的Tris-HCl。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述AR-V7的qRT-PCR法检测试剂中所述引物终浓度之和在100～900 nM之间，所述探针终浓度之和在25～500 nM之间。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，

所述AR-V7的qRT-PCR法检测试剂中，所述的AR探针和所述的AR-V7探针的5′端带有荧光基团，所述荧光基团包括：VIC、FAM、ROX或HEX；所述的AR探针和所述的AR-V7探针3′端带有淬灭基团，所述淬灭基团包括：MGB或BHQ1。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述AR-V7的qRT-PCR法检测试剂中的PCR反应液包括：

反应液A，包括：0.1～50 mM dATP，0.1～50 mM dCTP，0.1～50 mM dGTP，0.1～100 mMdUTP，1～500 mM MgCl2；和

反应液B，包括：1～1000 U的逆转录酶，1～500 U的RNA酶抑制剂，1～500 U的热启动DNA聚合酶，0.1～100 U的热敏的UDG酶，1～50 %的BSA溶液。