[发明专利]检测人叶酸代谢基因多态性的组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种能够检测叶酸代谢能力的多重PCR组合物，所述多重PCR组合物包括：

第一组：检测MTHFR C677T位点的寡核苷酸：如SEQ ID NO:1所示的上游引物、如SEQ IDNO:2所示的下游引物，以及如SEQ ID NO:3和4所示的探针，和检测MTRR A66G位点的寡核苷酸：如SEQ ID NO:5所示的上游引物、如SEQ ID NO:6所示的下游引物，以及如SEQ ID NO:7和8所示的探针；

第二组：检测MTHFR A1298C位点的寡核苷酸：如SEQ ID NO:9所示的上游引物、如SEQID NO:10所示的上游引物，以及如SEQ ID NO:11所示的下游引物，和检测SLC19A1 A80G位点的寡核苷酸：如SEQ ID NO:12所示的上游引物、如SEQ ID NO:13所示的上游引物，以及如SEQ ID NO:14所示的下游引物；

其中，第一组与第二组内分别检测两种位点的4种SNP类型所采用的荧光报告基团互不相同且互不干涉。

2.根据权利要求1所述的多重PCR组合物，其中，所述荧光报告基团互不干涉地选自FAM、HEX、ROX、VIC、CY5、5～TAMRA、TET、CY3和JOE。

3.权利要求1或2所述的多重PCR组合物在制备检测叶酸代谢能力的试剂盒中的用途。

4.一种用于检测叶酸代谢能力的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的多重PCR组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括核酸释放试剂、dNTP、DNA聚合酶，和PCR缓冲液中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述dNTP为2～3mmol/L、PCR缓冲液为3～7μL、DNA聚合酶为5U/μL～15U/μL。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其中，所述核酸释放试剂包括0.01～0.5mmol/L的莎梵婷、100～200mmol/L的氯化钾、50～200mmol/L的氯化锂、质量/体积比为0.1％～1％的十二烷基硫酸三乙醇胺、体积/体积比为0.1％～1％的乙基苯基聚乙二醇、质量/体积比为0.01％～2％的十二烷基磺酸钠和体积/体积比为0.05％～1％的乙醇。

8.一种用于制备检测叶酸代谢能力的多重PCR组合物的用途，所述检测包括以下步骤：

1)释放待测样本的核酸；

2)使用如权利要求1或2所述的多重PCR组合物或权利要求4～6中任一项所述的试剂盒对步骤1)获得的核酸进行荧光定量PCR；

3)获得并分析结果。

9.根据权利要求8所述的用途，所述样本为全血或者口腔拭子。

10.根据权利要求9所述的用途，所述第一组寡核苷酸适用于荧光探针法，所述第二组寡核苷酸适用于熔解曲线法。

11.根据权利要求10所述的用途，通过判断扩增曲线和CT值来分析结果。

12.根据权利要求9～11任一项所述的用途，其中，所述荧光定量PCR的反应条件为：