[发明专利]检测人叶酸代谢基因多态性的组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体的，涉及叶酸代谢能力检测领域。提供了一种组合物，其检测叶酸代谢能力；与此同时，还提供了所述组合物用于检测叶酸代谢能力的用途、包含所述组合物的试剂盒以及用于检测叶酸代谢能力的方法，使用本发明的组合物以及方法，可以实现一种通道同时检测两种SNP类型，实现了一管多测，节约了时间和成本，并且使得上机检测的样本能够增加。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，更具体的，属于人叶酸代谢基因多态性检测领域。

背景技术

叶酸是一种水溶性B族维生素，其代谢产生的活性结构-四氢叶酸，是影响体内同型半胱氨酸代谢的最主要因素。全世界已经公认，妇女围孕期增补叶酸可以预防胎儿神经管缺陷(NTDs)的初发及再发。由于叶酸与DNA的合成密切相关，妇女围孕期若摄入叶酸不足，则会导致同型半胱氨酸(HCY)向甲硫氨酸转化出现障碍，导致高HCY血症或低甲硫氨酸血症。高HCY血症可引起血管内皮损伤、促进血管平滑肌细胞增生，同时引起凝血和纤溶系统功能失调，使血液处于高凝状态。近年来研究发现，血浆中HCY水平升高与习惯性流产、胎盘早剥、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、早产、低体重儿等现象的发生密切相关。此外，有研究证明妇女在怀孕的前6周内如果摄入叶酸不足，则生育无脑儿和脑脊柱裂的畸形儿的可能性会增加4倍。

同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是由甲硫氨酸(methionine)脱甲基分解产生的一种具有细胞毒性的含硫氨基酸，在代谢过程中由于N5,10～亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)的活性低则会导致血浆Hcy含量增高，引起高同型半胱氨酸血症(HHcy)，而SLC19A1 A80G位点突变可引起叶酸转运缺陷，进而使得对正在发育的胚胎，特别是叶酸穿过胎盘的运输有重要影响。而HHcy是心脑血管疾病、早产、脑梗死、唇腭裂、神经管畸形等的危险因子。对人类体细胞MTHFR基因的C677T、A1298C基因多态性、MTRR基因的A66G基因多态性以及SLC19A1基因的A80G基因多态性做检测，可以发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，实现个性化增补叶酸。

中国专利公开CN110257507A公开了一种孕期叶酸代谢检测方法，其中涉及MTHFRC677T位点、MTHFR A1298C位点(MTHFR S2位点)、MTRR A66G位点(MTRR S2位点)和SLC19A1A80G位点(SLC19A1S1位点)。但是其采用多重PCR-LDR技术结合遗传分析仪的毛细管电泳技术进行检测，此方法需要专业人员才能进行，并且所需检测时间较长，成本较高。因此，针对此问题，现有技术当中采用荧光定量PCR进行检测，中国公开CN108034710A公开了一种基于荧光定量PCR检测MTHFR C677T位点、MTHFR A1298C位点、MTRR A66G位点的方法，但其一个通道只能检测一种SNP类型，并且其只能实现一管一测，不能实现一管多测，使得上机检测样本受到限制，同时其也未能检测SLC19A1 A80G位点。

有鉴于此，本领域需要一种检测位点全面，可以实现一管多测，从而节约时间和成本，并且使得上机检测的样本增加的产品。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明的提供一种能够检测叶酸代谢能力的组合物，所述组合物包括：

第一组：检测MTHFR C677T位点的寡核苷酸，包括：如SEQ ID NO:1所示的上游引物、如SEQ ID NO:2所示的下游引物，以及如SEQ ID NO:3和4所示的探针，和检测MTRR A66G位点的寡核苷酸，包括：如SEQ ID NO:5所示的上游引物、如SEQ ID NO:6所示的下游引物，以及如SEQ ID NO:7和8所示的探针；