[发明专利]咪唑二肽的制备方法

权利要求书

1.使用具有咪唑二肽合成活性的微生物制备咪唑二肽的方法，

所述制备方法通过利用所述微生物具有的ATP供给系统，不包括添加ATP的工序，或包括添加以摩尔数换算计少于制备的咪唑二肽量的ATP量的工序。

2.根据权利要求1所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述咪唑二肽选自肌肽、鹅肌肽或鲸肌肽。

3.根据权利要求1或2所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述微生物为表达L-氨基酸α-连接酶的微生物。

4.根据权利要求3所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述L-氨基酸α-连接酶为具有咪唑二肽合成活性的蛋白质。

5.根据权利要求3或4所述的咪唑二肽的制备方法，其中，

所述L-氨基酸α-连接酶为具有序列号12表示的氨基酸序列的野生型YwfE氨基酸序列中的1个残基～3个残基的氨基酸残基被置换的突变型L-氨基酸α-连接酶，其中包含：

对相当于序列号12的N末端起第108位天冬酰胺(N)残基的氨基酸残基进行的选自丙氨酸(A)、谷氨酸(E)或谷氨酰胺(Q)的氨基酸置换，

对相当于序列号12的N末端起第112位异亮氨酸(I)残基的氨基酸残基进行的缬氨酸(V)置换，

和/或

对相当于序列号12的N末端起第378位组氨酸(H)残基的氨基酸残基进行的选自赖氨酸(K)或精氨酸(R)的氨基酸置换。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述制备方法包括菌体反应法或发酵法。

7.根据权利要求6所述的咪唑二肽的制备方法，其包括添加所述微生物能够代谢的糖质的工序。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述微生物为肽酶缺陷株。

9.根据权利要求8所述的咪唑二肽的制备方法，其中，所述肽酶为PepD。

10.鹅肌肽的制备方法，所述方法通过包括下述工序制备鹅肌肽，所述工序为使作为权利要求2～9中任一项的微生物制备的咪唑二肽的肌肽进一步与具有肌肽N-甲基转移酶活性的酶进行反应。

11.根据权利要求10所述的鹅肌肽的制备方法，其中使用表达具有肌肽N-甲基转移酶活性的酶的微生物。

12.根据权利要求10或11所述的鹅肌肽的制备方法，其中使用下述微生物，所述微生物共表达作为所述L-氨基酸α-连接酶的具有肌肽合成活性的酶，和具有肌肽N-甲基转移酶活性的酶。

13.根据权利要求10～12中任一项所述的鹅肌肽的制备方法，其中，所述具有肌肽N-甲基转移酶活性的酶为序列号36所示的酶。

14.根据权利要求10～13中任一项所述的鹅肌肽的制备方法，其中，所述制备方法为发酵法。