[发明专利]咪唑二肽的制备方法

说明书

[课题]本发明的课题在于提供能够高效率且低成本地生产选自肌肽及鹅肌肽及鲸肌肽的咪唑二肽的制备方法。[解决手段]本发明提供使用具有咪唑二肽合成活性的微生物制备咪唑二肽的方法，所述制备方法通过利用所述微生物具有的ATP供给系统，不包括添加ATP的工序，或包括添加以摩尔数换算计少于制备的咪唑二肽量的ATP量的工序。另外，提供由肌肽制备鹅肌肽的方法等。

技术领域

本发明涉及肌肽、鹅肌肽及鲸肌肽等咪唑二肽的制备方法。

背景技术

咪唑二肽为包含咪唑基的氨基酸残基键合而成的肽的总称，包括：肌肽(carnosine：β-丙氨酰-L-组氨酸)，鹅肌肽(anserine：β-丙氨酰-3-甲基-L-组氨酸)及鲸肌肽(balenine：Nα-β-丙氨酰-1-甲基-L-组氨酸)等包含β-丙氨酸与组氨酸残基或其衍生物的二肽。这些二肽在长距离飞行的鸟类的胸肉，金枪鱼、鲣鱼、鲸等长距离回游的海洋生物的肌肉中含量较多，已知有抗疲劳效果、去除活性氧的能力、降血压作用、抗炎作用及降低尿酸值作用等，已将从鸡等家畜的肌肉提取的这些咪唑二肽用作营养补充剂食品(非专利文献1～3)。但是，尚未建立针对肌肽、鹅肌肽及鲸肌肽的高效率且低成本的制备方法。

虽然也尝试了制作L-氨基酸α-连接酶的突变体而在肌肽合成中的应用，但从效率且经济的观点出发仍不够充分(专利文献1)。

本发明人以建立咪唑二肽的简便且低成本的制备方法为目标，制作了各种作为L-氨基酸α-连接酶的来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的YwfE的突变型(专利文献2)。但是，L-氨基酸α-连接酶在β-丙氨酸与组氨酸或其衍生物进行缩合时，与ATP的水解反应共轭反应，因此，以往在咪唑二肽的制备反应时需要添加ATP。

另一方面，已知将肌肽转换为鹅肌肽的酶(非专利文献4)。但对于使用了大肠杆菌(E.coli)的由肌肽产生鹅肌肽的方法，尚属未知。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-081405号公报

专利文献2：日本特开2018-102287号公报

非专利文献

非专利文献1：Song B.等，Nutr.Res.Pract.2014，8：310

非专利文献2：Bellia F.等，Molecules 2014，19：2299-2329

非专利文献3：Boldyrev A.A.等，Physiol.Rev.2013，93：1803-45

非专利文献4：Drozak J.等，J.Biol.Chem.2015，290：17190-17205

发明内容

发明所要解决的技术问题

本发明的课题在于提供能高效率且低成本地生产选自肌肽及鹅肌肽及鲸肌肽的咪唑二肽的制备方法。

解决问题的手段

作为咪唑二肽的酶合成法，本发明人着眼于通过与专利文献2中记载的ATP的水解反应共轭，将无保护的氨基酸作为底物而形成肽键，由此合成咪唑二肽，发现通过将具有咪唑二肽合成活性的微生物与ATP供给系统组合，能高效率且低成本地制备咪唑二肽，从而完成了本发明。

另外，本发明人建立了由肌肽制备鹅肌肽的方法。

具体而言，本发明提供一种使用具有咪唑二肽合成活性的微生物制备咪唑二肽的方法，前述制备方法通过利用前述微生物具有的ATP供给系统，不包括添加ATP的工序，或包括添加以摩尔数换算计少于制备的咪唑二肽量的ATP量的工序。