[发明专利]藻红蛋白免疫荧光探针标记方法有效

专利信息
申请号: 202010087828.0 申请日: 2020-02-12
公开(公告)号: CN111308063B 公开(公告)日: 2023-07-07
发明(设计)人: 张洋 申请(专利权)人: 湖州正熙医学检验实验室有限公司
主分类号: G01N33/533 分类号: G01N33/533;G01N33/68
代理公司: 浙江永鼎律师事务所 33233 代理人: 方惠琴
地址: 313200 浙江省湖州市*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 蛋白 免疫 荧光 探针 标记 方法
【权利要求书】:

1.一种藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)采用胺-巯基交联剂活化目标蛋白;

(2)对藻红蛋白作巯基化处理,获得巯基化的藻红蛋白;

具体地,采用2-亚氨基硫烷盐酸盐对脱盐后的藻红蛋白作巯基化处理;

(3)将巯基化的藻红蛋白与活化后的目标蛋白交联,获得所述的藻红蛋白免疫荧光探针。

2.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的胺-巯基交联剂包括SMCC、Sulfo-SMCC、SPDP或SMPH。

3.如权利要求2所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,目标蛋白与SMCC的摩尔比为1:10~1:100。

4.如权利要求1-3中任意一项所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(1)中,按预设摩尔比向目标蛋白溶液中加入胺-巯基交联剂溶液后,置于25℃以上的室温下反应1.5h。

5.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(2)中,在巯基化处理前,先对藻红蛋白悬浊液作脱盐处理。

6.如权利要求5所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,所述的脱盐处理包括:

(2-1-1)将藻红蛋白悬浊液震荡均匀,而后离心、去上清;

(2-1-2)向沉淀中加入含有EDTA的PBS缓冲液,待充分溶解后离心,取藻红蛋白上清液;

(2-1-3)将藻红蛋白上清液置于超滤管内,采用含有EDTA的PBS缓冲液对藻红蛋白上清液作超滤处理,获得脱盐后的藻红蛋白。

7.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,藻红蛋白与2-亚氨基硫烷盐酸盐之间的摩尔比为1:10~1:50。

8.如权利要求1或7所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,所述的巯基化处理包括:将脱盐后的藻红蛋白与2-亚氨基硫烷盐酸盐按预设摩尔比混合后,置于25℃以上的室温下避光反应1.5h。

9.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(3)中,将巯基化的藻红蛋白与活化后的目标蛋白按摩尔比3:1混匀后,置于25℃以上室温下避光反应3h。

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