[发明专利]藻红蛋白免疫荧光探针标记方法有效
申请号: | 202010087828.0 | 申请日: | 2020-02-12 |
公开(公告)号: | CN111308063B | 公开(公告)日: | 2023-07-07 |
发明(设计)人: | 张洋 | 申请(专利权)人: | 湖州正熙医学检验实验室有限公司 |
主分类号: | G01N33/533 | 分类号: | G01N33/533;G01N33/68 |
代理公司: | 浙江永鼎律师事务所 33233 | 代理人: | 方惠琴 |
地址: | 313200 浙江省湖州市*** | 国省代码: | 浙江;33 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 蛋白 免疫 荧光 探针 标记 方法 | ||
1.一种藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)采用胺-巯基交联剂活化目标蛋白;
(2)对藻红蛋白作巯基化处理,获得巯基化的藻红蛋白;
具体地,采用2-亚氨基硫烷盐酸盐对脱盐后的藻红蛋白作巯基化处理;
(3)将巯基化的藻红蛋白与活化后的目标蛋白交联,获得所述的藻红蛋白免疫荧光探针。
2.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的胺-巯基交联剂包括SMCC、Sulfo-SMCC、SPDP或SMPH。
3.如权利要求2所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,目标蛋白与SMCC的摩尔比为1:10~1:100。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(1)中,按预设摩尔比向目标蛋白溶液中加入胺-巯基交联剂溶液后,置于25℃以上的室温下反应1.5h。
5.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(2)中,在巯基化处理前,先对藻红蛋白悬浊液作脱盐处理。
6.如权利要求5所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,所述的脱盐处理包括:
(2-1-1)将藻红蛋白悬浊液震荡均匀,而后离心、去上清;
(2-1-2)向沉淀中加入含有EDTA的PBS缓冲液,待充分溶解后离心,取藻红蛋白上清液;
(2-1-3)将藻红蛋白上清液置于超滤管内,采用含有EDTA的PBS缓冲液对藻红蛋白上清液作超滤处理,获得脱盐后的藻红蛋白。
7.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,藻红蛋白与2-亚氨基硫烷盐酸盐之间的摩尔比为1:10~1:50。
8.如权利要求1或7所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,所述的巯基化处理包括:将脱盐后的藻红蛋白与2-亚氨基硫烷盐酸盐按预设摩尔比混合后,置于25℃以上的室温下避光反应1.5h。
9.如权利要求1所述的藻红蛋白免疫荧光探针标记方法,其特征在于,步骤(3)中,将巯基化的藻红蛋白与活化后的目标蛋白按摩尔比3:1混匀后,置于25℃以上室温下避光反应3h。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖州正熙医学检验实验室有限公司,未经湖州正熙医学检验实验室有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010087828.0/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。