[发明专利]BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法

权利要求书

1.一种涉及4,4’-双(二苯基次磷酰基)二苯基酮衍生物的BDK辅助基团，其特征在于：BDK分子结构通式为

2.一种采用权利要求所述BDK辅助基团进行基团辅助的普卡那肽及其类似物物液相的合成方法，其特征在于步骤如下：

步骤1、辅助基团与氨基酸的偶联：以辅助基团在脱水偶联剂的作用下与氨基酸在0～50℃下搅拌反应1～3小时，氨酸Fmoc-Xaa₁-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa₁-BDK；

所述氨基酸与BDK辅助基团的摩尔比为1～3:1；所述脱水偶联剂为1︰1摩尔比的脱水偶联活化剂和碱性物质；

所述辅助基团为磷酰氧基苯甲醇BDK；

所述氨基酸采用芴甲氧羰基Fmoc保护的某氨酸Fmoc-Xaa₁-OH的C-端与BDK辅助基团连接，生成中间体化合物1，Fmoc-Xaa₁-BDK；

步骤2、分离纯化：向生成物1加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物1与其他杂质分离；

对分离后的生成物1进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物1；

步骤3、脱除N-端Fmoc：将纯化的生成物1采用脱Fmoc试剂处理，在10～50℃下搅拌反应0.5～2小时得到生成物2；

向生成物2加入极性小的烷烃或醚类溶剂，借助BDK辅助基团在溶剂系统中易结晶沉淀的特性，将生成物2与其他杂质分离；

对分离后的生成物2进行过滤和洗涤或重结晶操作得到纯化的生成物2，H₂N-Xaa₁-BDK.

步骤4：以纯化的含有辅助基团BDK的生成物2和H₂N-Xaa₁-BDK作为原料，以再与保护的半胱氨酸Fmoc-Cys(Trt)-OH进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物H₂N-Cys(Trt)-Xaa₁-BDK；

以第一次循环重复后纯化的生成物H₂N-Cys(Trt)-Xaa₁-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，以芴甲氧羰基(Fmoc)保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物，H₂N-Gly-Cys(Trt)-Xaa₁-BDK；

以第二次循环重复后纯化的生成物H₂N-Gly-Cys(Trt)-Xaa₁-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，以保护的苏氨酸Fmoc-Thr(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到化合物H₂N-Thr(tBu)-Gly-Phe-Xaa₁-BDK；

以上次循环重复后纯化的生成物H₂N-Gly-Cys(Trt)-Xaa₁-BDK作为原料，替代步骤1的辅助基团，依次以Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Glu(tBu)-OH、Fmoc-Xaa₂-OH[Fmoc-Glu(tBu)-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；重复步骤1～步骤3，得到普卡那肽及其类似物的前体化合物H₂N-X₃-Asp(tBu)-X₂-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys(Trt)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Ac m)-Thr(tBu)-Cys(Trt)-Xaa1-BDK；

或依次以Fmoc-Asp(tBu)-OH]、Fmoc-Asp(tBu)-OH和Fmoc-Xaa₃-OH[Fmoc-Asn-OH替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；

或依次以Fmoc-^DAsn-OH]替代步骤1的氨基酸进行偶联反应；

步骤5、侧链脱Trt保护基团：采用25％TFA/DCM处理化合物4，脱除侧链上的保护基团Trt，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物5，其氨基酸序列如下：H₂N-Xaa3-Asp(tBu)-Xaa2-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Glu(tBu)-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys(Acm)-Thr(tBu)-Cys-Xaa1-BDK；

步骤6、第一次氧化环合：将氧化试剂加入上述化合物5的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物6，其氨基酸序列如下：

步骤7、第二次氧化环合：将适量氧化试剂碘加入上述化合物6的乙腈溶液中，搅拌反应2小时后回收乙腈，用乙酸乙酯溶解，经辅助沉淀分离，纯化得到化合物7，其氨基酸序列如下：

步骤8、脱除全部侧链保护并剪除载体：向上述所得产物7中加入足量的脱保护试剂(TFA:Tis:H₂O＝95:2.5:2.5)，室温下搅拌3-5小时。反应完毕后，旋蒸回收三氟乙酸TFA，残留溶液用适量的乙醇溶解，加入乙酸乙酯，普卡那肽及其类似物因溶解度小而以沉淀形式析出，过滤并用适量乙酸乙酯洗涤沉淀，收集沉淀并干燥后即得普卡那肽及其类似物8，其氨基酸序列如下(Z＝O,S,NH等)：

所述氧化试剂：3.6g的过氧化尿素加入100mL的DMSO溶解溶液。