[发明专利]BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及类似物的液相全合成方法

说明书

本发明涉及一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及其类似物的液相全合成方法，合成步骤：BDK辅助基团替代固相树脂，在偶联脱水剂的作用下与N‑端Fmoc保护的氨基酸的C‑端连接；然后分离纯化、脱除N‑端Fmoc、多肽偶联；重复以上依次偶联上相应的氨基酸，构建普卡那肽及其类似物前体的氨基酸序列；再侧链脱保护、分离纯化得到普卡那肽及其类似物。与目前已有的合成方法相比，本发明兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备谷胱甘肽，而且磷酸酯类载体可以回收再生并循环利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。

技术领域

本发明属于有机化学与多肽合成领域，涉及一种BDK辅助基团及基于BDK辅助基团的普卡那肽及其类似物的液相全合成方法。尤其涉及合成普卡那肽及其类似物的一种基于小分子载体，4,4’-双(二苯基次磷酰氧基)二苯甲酮衍生物(4,4’-Bisdiphenylphosphinyloxyl Diphenyl Ketone，BDK结构式如图2中的A)的普卡那肽及其类似物(结构见图2)的液相全合成方法的普卡那肽及其类似物全合成方法(合成路线如图2所示)。本发明以磷酸酯类小分子BDK 衍生物为载体替代固相树脂载体，辅助分离纯化，兼备了液相和固相合成法的优点，可以更加简便、快捷、节约、高效地合成制备普卡那肽及其类似物，而且磷酸酯类载体可以回收并再生利用，降低原材料浪费，减少废弃物污染，节约成本，利于环保。

背景技术

普卡那肽(Plecanatide，结构见图2)，其他译名为皮卡那肽，研究代号SP-304和GC^RA 等。最初由美国Callisto制药公司研制，然后转让给Synergy Pharmaceuticals开发的口服鸟苷酸环化酶-C(GC-C)激动剂，于2017年1月19日首先获得美国食品药品管理局(FDA)批准上市，商品名为Trulance。普卡那肽是促尿钠排泄的鸟苷酸环化酶C(Guanylatecyclase-C， GC-C)受体激动药，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，用于治疗成人胃肠道疾病，如慢性特发性便秘(Chronicidiopathicconstipation，CIC) 和便秘型肠易激综合征(IBS-C)。它是一种合成的人类尿鸟苷蛋白(Uroguanylin，UG)的类似物，含有双二硫键连接的16个氨基酸的环状多肽，英文化学名为： L-asparaginyl-L-α-aspartyl-L-α-glutamyl-L-cysteinyl-L-α-glutamyl-L-leucyl-L-cysteinyl-L-valyl-L -asparaginyl-L-valyl-L-alanyl-L-cysteinyl-L-threonyl-L-glycyl-L-cysteinyl-L-leucine cyclic(4→12), (7→15)-bis(disulfide)，中文化学名为(第4与12位L-半胱氨酸)，(第7与15位L-半胱氨酸) 环状双二硫键结合的L-天冬酰胺酰基-L-α-天冬氨酰基-L-α-谷氨酰基-L-半胱氨酰基-L-α-谷氨酰基-L-亮氨酰基-L-半胱氨酰基-L-缬氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-缬氨酰基-L-丙氨酰基-L-半胱氨酰基-L-苏氨酰甘氨酰-L-甘氨酰基-L-半胱氨酰基-L-亮氨酸。普卡那肽的氨基酸序列与尿鸟苷的相似，只是在尿鸟苷N-端的3位用谷氨酸(Glu)取代天冬氨酸(Asp)。普卡那肽的结构与多卡那肽(Dolcanatide)相似，只是两端的氨基酸被它们各自的D-立体异构体所取代。普卡那肽及其类似物具有四个半胱氨酸(Cys)，能够形成两个分子内二硫键，见文献1： Shailubhai K.,Comiskey S.,Foss J.A.,Feng R.,Barrow L.,Comer G.M,JacoG.S.b.Plecanatide, an Oral Guanylate Cyclase C Agonist Acting Locally in theGastrointestinal Tract,Is Safe and Well-Tolerated in SingleDoses.Dig.Dis.Sci.,2013,58:2580–2586.DOI 10.1007/s10620-013-2684-z.和文献2：Shailubhai K.,Palejwala V.,Arjunan K.P.,Saykhedka S.r, Nefsky B.,J.AFoss,Comiskey S.,Jacob G.S.,S.E.Plevy.Plecanatide and dolcanatide,novel guanylatecyclase-C agonists,ameliorate gastrointestinal inflammation in experimentalmodels of murine colitis.World J.Gastrointest Pharmacol Ther.,2015,6(4):213-222.。Plecanatide的分子量为1.682kDa，与天然尿鸟苷蛋白(Uroguanylin)有1个氨基酸区别，使得其稳定性更好、与 GC-C受体的结合活性增强了8倍，Dolcanatide为Synergy公司开发的第二个Uroguanylin类似物，目前处于溃疡性结肠炎(UC)的Phase 1临床研究阶段，结构如图2。