[发明专利]一种检测人MUT基因突变的引物组及其试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测MUT基因突变的引物组，该引物组包括13对特异性扩增MUT基因第1至第13外显子的引物；本发明采用特异性引物组，针对MUT基因的第1到第13外显子进行突变检测，确保了测定结果的准确性与特异性。与传统的单一突变位点的检测而言，扩大了检测突变范围至MUT外显子区所有位点，覆盖已报道的突变位点与可能的突变位点。与传统的通过荧光定量PCR采用探针法检测相比，降低了检测成本，同时PCR产物通过DNA序列测定以及后续序列比对完成，其准确性要高于荧光定量PCR。与高通量测序相比较，直接对MUT致病基因进行检测，避免了高通量测序中因原始数据筛选、阈值设定等问题而可能出现的假阳性与假阴性问题；同时节省了成本与人力。

技术领域

本发明涉及检测人MUT基因突变的引物组及其试剂盒，具体涉及MUT基因突变所导致的甲基丙二酸血症(methylmalonic academia，MMA)的基因检测，属于儿童遗传代谢性疾病基因检测技术领域。

背景技术

甲基丙二酸血症(methylmalonic academia，MMA)在我国是一种常见的有机酸血症，主要是由于甲基丙二酰辅酶A变位酶(methylmalonyl-CoA mutase，MCM)自身缺陷或其辅酶腺苷钴胺素代谢缺陷，导致患者体内甲基丙二酸、甲基枸橼酸、3-羟基丙酸等代谢产物蓄积引起的疾病。该病病因复杂，主要包括甲基丙二酰辅酶A变位酶酶蛋白(mutaseapoenzyme,Mut)缺陷型及其辅酶腺苷钴胺素(cobalamin，Cbl，维生素B12)缺陷型，均为常染色体隐性遗传病。MCM缺陷型根据酶的残余活性可分为mut⁰型(完全无活性)及mut^-型(有残余活性者)，腺苷钴胺素代谢障碍包括：腺苷钴胺素合成缺陷型，即线粒体钴胺素还原酶缺乏(cblA)和钴胺素腺苷转移酶缺乏(cblB)；以及3种由于胞浆和溶酶体钴胺素代谢异常引起的腺苷钴胺素和甲基钴胺素合成缺陷型(cblC、cblD和cblF)。其中mut⁰，mut-，cblA和cblB型患者临床表现类似，仅表现甲基丙二酸血症，通常称为单纯型MMA。cblC，cblD，cblF型患者则合并同型半胱氨酸血症，是中国MMA患者中的常见类型。

甲基丙二酸血症发病年龄各异，新生儿期至成人期均可发病，且临床症状复杂多样，缺乏特异性，伴有多种并发症，极易误诊。新生儿期患儿临床表现主要为呕吐、喂养困难、嗜睡、惊厥等，并发症主要表现为脑损伤、合并肺炎等疾病。与甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症相比，单纯型MMA患者病情多数更为严重，起病急，发病快，且早期临床症状仅表现为非特异性，如拒奶，呕吐，嗜睡等，但疾病进展迅速，可导致严重性脑损伤，代谢性酸中毒，死亡率高，且预后不良。有研究显示，相较于其他甲基丙二酸血症类型，单纯性甲基丙二酸血症患儿多为早发型，多于1岁内发病，80％在出生后一周内就会出现症状，90％在一个月内出现症状。同时症状较重，脑损伤多累及双侧苍白球，且多数经维生素B12治疗无效，体内有机酸水平及丙酰基肉碱水平并无明显降低，预后较差，智力落后等并发症及死亡率极高。已有报道显示mut⁰型预后最差，60％患儿死亡，而40％各方面发育均显著迟缓^[20-23]。迟发型较为罕见，常于1岁后发病，临床表型显示非特异性，症状较轻，且预后较好。

甲基丙二酰辅酶A变位酶编码基因被命名为MUT(OMIM251000)，定位于染色体6p21.2-p12，由13个外显子组成，编码750个氨基酸。至今已发现MUT基因突变200余种，其中多为错义突变，且多见于外显子2和3。国外报道该病的患病率约为1/80000～1/50000，我国目前还没有发病率的整体研究。对由MUT基因引起的单纯型甲基丙二酸血症患者的临床症状进行总结分析，以期发现基因型和表型的相关型，丰富MUT基因突变谱，对MCM型患者早期诊断提供帮助。目前甲基丙二酸血症MUT基因突变的报道很少，这里针对该基因进行了突变引物设计及其相应基因突变检测试剂盒的研发。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供检测人MUT基因突变的引物组及其试剂盒。