[发明专利]苦瓜外泌体的提取方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了一种苦瓜外泌体的提取方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用，提取步骤如下：取适量新鲜云南山野苦瓜，去籽洗净并晾干；榨取苦瓜汁，将苦瓜汁连续离心，离心后取上清，弃沉淀；将取得的上清超速离心，弃上清，取沉淀，沉淀悬浮于1‑2mL的磷酸缓冲盐溶液中；将悬浮液用0.22μm的滤膜过滤，滤液再次于超速冷冻离心机中离心，弃上清，取沉淀，沉淀悬浮于1‑2mL的磷酸缓冲盐溶液中。提取的苦瓜外泌体可用于制备抗肿瘤药物。本发明的提取方法方便有效，提取纯度高，提取的苦瓜外泌体能够抑制肿瘤细胞的增殖和迁移浸润，同时能够促进肿瘤细胞的凋亡，达到有效治疗肿瘤疾病的效果。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种苦瓜外泌体的提取方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

临床应用的抗肿瘤药物有化疗药物、生物制剂等，但是这些药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞有很强的杀伤作用。近年来，随着分子肿瘤学、分子药理学的发展，抗肿瘤药正从传统的非选择性单一的细胞毒性药物转向多环节作用的新型药物，抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代。

外泌体是由特定的蛋白质、脂质和核酸物质组成，携带多种miRNA，能够与靶细胞膜表面的特定受体结合，调控多种信号通路，调节各种生理和病理过程。能否从苦瓜中提取外泌体，并用于抗肿瘤治疗中，未见报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种苦瓜外泌体的提取方法，能够从植物苦瓜中提取外泌体。

本发明的目的之二是提供上述方法提取的苦瓜外泌体在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种苦瓜外泌体的提取方法，包括以下步骤：

(1)取适量新鲜云南山野苦瓜，去籽洗净后晾干；

(2)晾干后榨取苦瓜汁，将苦瓜汁连续离心，于4℃，1000g，10min；3000g，20min；10000g，40min；离心后取上清，弃沉淀；

(3)将取得的上清超速离心，于超速冷冻离心机中4℃，150000g，离心90min，离心后弃上清，取沉淀，沉淀悬浮于1-2mL的PBS缓冲液中；

(4)将悬浮液用0.22μm的滤膜过滤，滤液再次于超速冷冻离心机中4℃，150000g，离心90min，离心后弃上清，取沉淀，沉淀悬浮于1-2mL的PBS缓冲液中。

本发明还提供上述方法提取的苦瓜外泌体在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明还提供上述方法提取的苦瓜外泌体在制备肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用。其中，所述肿瘤细胞为T98G胶质瘤细胞或HepG2肝癌细胞。

将苦瓜外泌体与人胶质瘤细胞(T98G)、正常神经细胞(HT22)、人肝癌细胞(HepG2)、正常肝细胞(QSG7701)共培养，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验发现，在0.3-3μg/mL浓度范围内，苦瓜外泌体能明显抑制肿瘤细胞T98G、HepG2的增殖，而对正常细胞HT22、QSG 7701没有抑制作用。

在苦瓜外泌体浓度为3μg/mL的条件下，通过细胞克隆形成实验、细胞迁移实验(Transwell小室)证实苦瓜外泌体可以抑制T98G系的胶质瘤细胞和HepG2人肝癌细胞的增殖和迁移浸润；通过蛋白质免疫印迹实验Bcl-2/Bax的比值降低，证明外泌体能够促进肿瘤细胞的凋亡。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明提供的苦瓜外泌体提取方法能够从植物苦瓜中提取得到外泌体，方便有效，提取纯度高；

2.本发明提取的苦瓜外泌体能够抑制肿瘤细胞的增殖和迁移浸润，同时能够促进肿瘤细胞的凋亡，达到有效治疗肿瘤疾病的效果，从而实现在制备抗肿瘤的药物中的用途。

附图说明